CAJ | 학술논문

目的分析和确定遗传性出血性毛细血管扩张症(HHT)的临床表型.寻找鉴定HHT家系致病基因ALK1基因突变位点,建立HHT的基因诊断方法.方法用鼻内镜直视并动态摄影观察先证者鼻腔黏膜扩张的毛细血管,并进行遗传史的家系调查;用聚合酶链反应(PCR)扩增先证者ALK1基因3、7、8号外显子,并进行PCR产物核苷酸测序.确定突变位点后,扩增2例正常人及HHT家系成员(4例)的对应基因区域并行核苷酸序列分析.用Western印迹技术对先证者及家系成员血浆中凝血酶调节蛋白(TM)进行检测,并对Western印迹结果进行灰度扫描,以半定量TM水平.结果该家系5名成员中,除无血缘关系的先证者弟媳外,其余4例均有不同程度的鼻出血或其他部位出血史;先证者及其父亲分别有明显的鼻黏膜或手指皮肤的毛细血管扩张;基因筛查结果显示:先证者,先证者弟弟及其父亲均在ALK1基因8号外显子第1231位核苷酸存在C→T突变(CGG→TGG),而先证者弟媳和侄儿未检测到1231位核苷酸的C→T变异,正常人不存在该位点的核苷酸变异.Western印迹技术分析血浆TM表达显示分子量在56 000处,2例正常对照,与3例HHT患者灰度扫描平均值分别为218.3和174.1;在28 000处,2例正常对照,与3例HHT患者灰度扫描平均值分别为222.0和145.1,HHT患者血浆中TM蛋白含量明显低于正常人.结论在中国的Ⅱ型HHT患者存在ALK1基因突变,突变位点位于8号外显子C1231T.HHT患者血浆中TM水平有降低趋势,其意义及机制尚待进一步确定.
목적분석화학정유전성출혈성모세혈관확장증(HHT)적림상표형.심조감정HHT가계치병기인ALK1기인돌변위점,건립HHT적기인진단방법.방법용비내경직시병동태섭영관찰선증자비강점막확장적모세혈관,병진행유전사적가계조사;용취합매련반응(PCR)확증선증자ALK1기인3、7、8호외현자,병진행PCR산물핵감산측서.학정돌변위점후,확증2례정상인급HHT가계성원(4례)적대응기인구역병행핵감산서렬분석.용Western인적기술대선증자급가계성원혈장중응혈매조절단백(TM)진행검측,병대Western인적결과진행회도소묘,이반정량TM수평.결과해가계5명성원중,제무혈연관계적선증자제식외,기여4례균유불동정도적비출혈혹기타부위출혈사;선증자급기부친분별유명현적비점막혹수지피부적모세혈관확장;기인사사결과현시:선증자,선증자제제급기부친균재ALK1기인8호외현자제1231위핵감산존재C→T돌변(CGG→TGG),이선증자제식화질인미검측도1231위핵감산적C→T변이,정상인불존재해위점적핵감산변이.Western인적기술분석혈장TM표체현시분자량재56 000처,2례정상대조,여3례HHT환자회도소묘평균치분별위218.3화174.1;재28 000처,2례정상대조,여3례HHT환자회도소묘평균치분별위222.0화145.1,HHT환자혈장중TM단백함량명현저우정상인.결론재중국적Ⅱ형HHT환자존재ALK1기인돌변,돌변위점위우8호외현자C1231T.HHT환자혈장중TM수평유강저추세,기의의급궤제상대진일보학정.