华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2009年
1期
94-97
,共4页
邢变枝%陈红%钱坤%湛彦强%张苏明
邢變枝%陳紅%錢坤%湛彥彊%張囌明
형변지%진홍%전곤%담언강%장소명
胚胎干细胞%细胞分化%音猬酸%维甲酸%运动神经元
胚胎榦細胞%細胞分化%音猬痠%維甲痠%運動神經元
배태간세포%세포분화%음위산%유갑산%운동신경원
目的 探讨胚胎干细胞(ESC)分化为运动神经元的方法.方法 用含重组人白血病抑制因子(LIF, 1 000 U/μl)的培养液培养胚胎干细胞,第3天,悬滴法培养拟胚体(embryoid body, EB),第5天添加音猬酸(sonic hedgehog,Shh,5 nmol/L)和维甲酸(RA,1 μmol/L),再培养5 d;然后将EB贴于铺有基质胶(matrigel)的培养皿上.采用免疫细胞荧光及流式细胞术检测运动神经元的分化.结果 胚胎干细胞可以在LIF存在条件下撤去饲养层细胞,并保持未分化状态,碱性磷酸酶和OCT-4检测阳性.Shh和RA处理后5 d,胚胎干细胞可以分化为运动神经元,运动神经元核转录因子HB-9阳性:未经Shh和RA处理的胚胎干细胞几乎没有HB-9阳性细胞.流式细胞检测(36.09±8.68)%EB细胞HB-9阳性表达.结论 胚胎干细胞在特殊的细胞因子作用下可以定向分化为特定的神经元;该培养方案可以定向分化胚胎干细胞为运动神经元.
目的 探討胚胎榦細胞(ESC)分化為運動神經元的方法.方法 用含重組人白血病抑製因子(LIF, 1 000 U/μl)的培養液培養胚胎榦細胞,第3天,懸滴法培養擬胚體(embryoid body, EB),第5天添加音猬痠(sonic hedgehog,Shh,5 nmol/L)和維甲痠(RA,1 μmol/L),再培養5 d;然後將EB貼于鋪有基質膠(matrigel)的培養皿上.採用免疫細胞熒光及流式細胞術檢測運動神經元的分化.結果 胚胎榦細胞可以在LIF存在條件下撤去飼養層細胞,併保持未分化狀態,堿性燐痠酶和OCT-4檢測暘性.Shh和RA處理後5 d,胚胎榦細胞可以分化為運動神經元,運動神經元覈轉錄因子HB-9暘性:未經Shh和RA處理的胚胎榦細胞幾乎沒有HB-9暘性細胞.流式細胞檢測(36.09±8.68)%EB細胞HB-9暘性錶達.結論 胚胎榦細胞在特殊的細胞因子作用下可以定嚮分化為特定的神經元;該培養方案可以定嚮分化胚胎榦細胞為運動神經元.
목적 탐토배태간세포(ESC)분화위운동신경원적방법.방법 용함중조인백혈병억제인자(LIF, 1 000 U/μl)적배양액배양배태간세포,제3천,현적법배양의배체(embryoid body, EB),제5천첨가음위산(sonic hedgehog,Shh,5 nmol/L)화유갑산(RA,1 μmol/L),재배양5 d;연후장EB첩우포유기질효(matrigel)적배양명상.채용면역세포형광급류식세포술검측운동신경원적분화.결과 배태간세포가이재LIF존재조건하철거사양층세포,병보지미분화상태,감성린산매화OCT-4검측양성.Shh화RA처리후5 d,배태간세포가이분화위운동신경원,운동신경원핵전록인자HB-9양성:미경Shh화RA처리적배태간세포궤호몰유HB-9양성세포.류식세포검측(36.09±8.68)%EB세포HB-9양성표체.결론 배태간세포재특수적세포인자작용하가이정향분화위특정적신경원;해배양방안가이정향분화배태간세포위운동신경원.
