中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
15期
2927-2930
,共4页
真核表达%共刺激信号%CTLA41g
真覈錶達%共刺激信號%CTLA41g
진핵표체%공자격신호%CTLA41g
背景:CTLA-41g的制备过程比较复杂,单克隆抗体的价格比较昂贵,而且应用CTLA-41g单克隆抗体注射本身存在着血浆药物浓度不稳定的问题.目的:探讨Ctla41g表达质粒构建的可行性.设计、时间及地点:基因水平观察实验,于2005/2006在中国医科大学中心实验室完成.材料:雄性Wistar大鼠10只,近交系昆明小鼠10只.方法:提取Wistar大鼠总RNA,反转录成cDNA第1链,PCR扩增CTLA4基因,将其和真核表达载体pcDNA3酶切、连接.转化感受态菌DH5α,培养后挑取刚性克隆、提取质粒,酶切鉴定重组子、测序,最后转染近交系昆明小鼠,应用Westen Blot法检测血清CTLA41g水平.主要观察指标:构建的Ctla41g表达质粒基因序是否正确以及能否在小鼠体内进行蛋白表达.结果:对含有pcDNA3-CTLA4质粒的LB菌液进行鉴定测序,目的基因片断大小为288 bp,与Genebank上公布的CTLA4序列完全一致,质粒构建正确.利用阳性脂质体载体包被pcDNA3一CTLA41g转染小鼠,有3只在第7天血清检测CTLA41g阳性,显示pcDNA3-CTLA41g能够在鼠肌细胞内表达.结论:利用基因合成和重组技术成功构建了真核表达载体pcDNA3-CTLA41g,利用脂质体法成功的将pcDNA3-CTLA41g转染到鼠肌细胞内并进行表达.
揹景:CTLA-41g的製備過程比較複雜,單剋隆抗體的價格比較昂貴,而且應用CTLA-41g單剋隆抗體註射本身存在著血漿藥物濃度不穩定的問題.目的:探討Ctla41g錶達質粒構建的可行性.設計、時間及地點:基因水平觀察實驗,于2005/2006在中國醫科大學中心實驗室完成.材料:雄性Wistar大鼠10隻,近交繫昆明小鼠10隻.方法:提取Wistar大鼠總RNA,反轉錄成cDNA第1鏈,PCR擴增CTLA4基因,將其和真覈錶達載體pcDNA3酶切、連接.轉化感受態菌DH5α,培養後挑取剛性剋隆、提取質粒,酶切鑒定重組子、測序,最後轉染近交繫昆明小鼠,應用Westen Blot法檢測血清CTLA41g水平.主要觀察指標:構建的Ctla41g錶達質粒基因序是否正確以及能否在小鼠體內進行蛋白錶達.結果:對含有pcDNA3-CTLA4質粒的LB菌液進行鑒定測序,目的基因片斷大小為288 bp,與Genebank上公佈的CTLA4序列完全一緻,質粒構建正確.利用暘性脂質體載體包被pcDNA3一CTLA41g轉染小鼠,有3隻在第7天血清檢測CTLA41g暘性,顯示pcDNA3-CTLA41g能夠在鼠肌細胞內錶達.結論:利用基因閤成和重組技術成功構建瞭真覈錶達載體pcDNA3-CTLA41g,利用脂質體法成功的將pcDNA3-CTLA41g轉染到鼠肌細胞內併進行錶達.
배경:CTLA-41g적제비과정비교복잡,단극륭항체적개격비교앙귀,이차응용CTLA-41g단극륭항체주사본신존재착혈장약물농도불은정적문제.목적:탐토Ctla41g표체질립구건적가행성.설계、시간급지점:기인수평관찰실험,우2005/2006재중국의과대학중심실험실완성.재료:웅성Wistar대서10지,근교계곤명소서10지.방법:제취Wistar대서총RNA,반전록성cDNA제1련,PCR확증CTLA4기인,장기화진핵표체재체pcDNA3매절、련접.전화감수태균DH5α,배양후도취강성극륭、제취질립,매절감정중조자、측서,최후전염근교계곤명소서,응용Westen Blot법검측혈청CTLA41g수평.주요관찰지표:구건적Ctla41g표체질립기인서시부정학이급능부재소서체내진행단백표체.결과:대함유pcDNA3-CTLA4질립적LB균액진행감정측서,목적기인편단대소위288 bp,여Genebank상공포적CTLA4서렬완전일치,질립구건정학.이용양성지질체재체포피pcDNA3일CTLA41g전염소서,유3지재제7천혈청검측CTLA41g양성,현시pcDNA3-CTLA41g능구재서기세포내표체.결론:이용기인합성화중조기술성공구건료진핵표체재체pcDNA3-CTLA41g,이용지질체법성공적장pcDNA3-CTLA41g전염도서기세포내병진행표체.
