温州医学院学报
溫州醫學院學報
온주의학원학보
JOURNAL OF WENZHOU MEDICAL COLLEGE
2009年
3期
213-216
,共4页
骆超%倪吴花%胡永仙%谭映霞%沈志坚%江松福%俞康
駱超%倪吳花%鬍永仙%譚映霞%瀋誌堅%江鬆福%俞康
락초%예오화%호영선%담영하%침지견%강송복%유강
CD13%单链抗体%蝎毒素%AGAP%质粒%肿瘤
CD13%單鏈抗體%蝎毒素%AGAP%質粒%腫瘤
CD13%단련항체%갈독소%AGAP%질립%종류
目的:构建pRSETA/AGAP/CD13scFv重组表达质粒,为重组CD13单链抗体/蝎毒素AGAP融合蛋白的表达奠定实验基础.方法:利用RT-PCR法从东亚钳蝎尾腺中获得AGAP目的基因,并与克隆质粒TOPO载体连接转入DH5α菌,用EcoR I和Hind III将目的基因从克隆质粒上切下并与同样双酶切后的表达质粒 pRSETA连接;在含CD13单链抗体(CD13scFv)的pSecTag2HygroC/CD13 -1/RFP质粒中获得CD13scFv目的基因,用EcoR I、Xho I双酶切并与同样双酶切后的pRSETA/AGAP连接转入DH5α菌,提取重组质粒进行酶切及测序鉴定.结果:目的基因AGAP与表达质粒pRSETA连接,成功构建了pRSETA/AGAP重组质粒;目的基因CD13scFv再与该重组质粒连接,成功构建了pRSETA/AGAP/CD13scFv.结论:AGAP目的基因能经RT-PCR法获得,并能成功与表达质粒连接,构建pRSETA/AGAP;目的基因CD13scFv能由pSecTag2HygroC质粒中获得,并成功与pRSETA/AGAP连接,得pRSETA/AGAP/CD13scFv重组质粒.为该重组质粒体外融合蛋白的表达及今后研究CD13scFv和蝎毒素AGAP协同性杀伤CD13阳性肿瘤细胞提供了良好的实验基础及理论依据.
目的:構建pRSETA/AGAP/CD13scFv重組錶達質粒,為重組CD13單鏈抗體/蝎毒素AGAP融閤蛋白的錶達奠定實驗基礎.方法:利用RT-PCR法從東亞鉗蝎尾腺中穫得AGAP目的基因,併與剋隆質粒TOPO載體連接轉入DH5α菌,用EcoR I和Hind III將目的基因從剋隆質粒上切下併與同樣雙酶切後的錶達質粒 pRSETA連接;在含CD13單鏈抗體(CD13scFv)的pSecTag2HygroC/CD13 -1/RFP質粒中穫得CD13scFv目的基因,用EcoR I、Xho I雙酶切併與同樣雙酶切後的pRSETA/AGAP連接轉入DH5α菌,提取重組質粒進行酶切及測序鑒定.結果:目的基因AGAP與錶達質粒pRSETA連接,成功構建瞭pRSETA/AGAP重組質粒;目的基因CD13scFv再與該重組質粒連接,成功構建瞭pRSETA/AGAP/CD13scFv.結論:AGAP目的基因能經RT-PCR法穫得,併能成功與錶達質粒連接,構建pRSETA/AGAP;目的基因CD13scFv能由pSecTag2HygroC質粒中穫得,併成功與pRSETA/AGAP連接,得pRSETA/AGAP/CD13scFv重組質粒.為該重組質粒體外融閤蛋白的錶達及今後研究CD13scFv和蝎毒素AGAP協同性殺傷CD13暘性腫瘤細胞提供瞭良好的實驗基礎及理論依據.
목적:구건pRSETA/AGAP/CD13scFv중조표체질립,위중조CD13단련항체/갈독소AGAP융합단백적표체전정실험기출.방법:이용RT-PCR법종동아겸갈미선중획득AGAP목적기인,병여극륭질립TOPO재체련접전입DH5α균,용EcoR I화Hind III장목적기인종극륭질립상절하병여동양쌍매절후적표체질립 pRSETA련접;재함CD13단련항체(CD13scFv)적pSecTag2HygroC/CD13 -1/RFP질립중획득CD13scFv목적기인,용EcoR I、Xho I쌍매절병여동양쌍매절후적pRSETA/AGAP련접전입DH5α균,제취중조질립진행매절급측서감정.결과:목적기인AGAP여표체질립pRSETA련접,성공구건료pRSETA/AGAP중조질립;목적기인CD13scFv재여해중조질립련접,성공구건료pRSETA/AGAP/CD13scFv.결론:AGAP목적기인능경RT-PCR법획득,병능성공여표체질립련접,구건pRSETA/AGAP;목적기인CD13scFv능유pSecTag2HygroC질립중획득,병성공여pRSETA/AGAP련접,득pRSETA/AGAP/CD13scFv중조질립.위해중조질립체외융합단백적표체급금후연구CD13scFv화갈독소AGAP협동성살상CD13양성종류세포제공료량호적실험기출급이론의거.
