应用预防医学
應用預防醫學
응용예방의학
JOURNAL OF APPLIED PREVENTIVE MEDICINE
2009年
4期
198-202
,共5页
林睿%黎学铭%张陆娟%秦英梅%张鸿满%欧阳颐%黄绍标%江河
林睿%黎學銘%張陸娟%秦英梅%張鴻滿%歐暘頤%黃紹標%江河
림예%려학명%장륙연%진영매%장홍만%구양이%황소표%강하
AIDS%耶氏肺孢子虫%内转录间隔区(ITS)%巢式PCR
AIDS%耶氏肺孢子蟲%內轉錄間隔區(ITS)%巢式PCR
AIDS%야씨폐포자충%내전록간격구(ITS)%소식PCR
目的 探讨ITS巢式PCR检测AIDS患者合并耶氏肺孢子虫感染的应用价值并对ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因进行克隆测序.方法 收集AIDS患者痰液标本,用二硫苏糖醇(DTT)消化处理后进行六亚甲基四胺银(CMS)染色镜检;提取肺孢子虫DNA后进行巢式PCR扩增,选取GMS染色和PCR同时阳性的112号和仅PCR阳性的185、200号病例的PCR产物进行TA克隆、测序,然后用Blastn程序和DNANAN软件对所测序列进行同源性比较和序列间比对,并和GenBank登录的耶氏肺孢子虫ITS1-5.KS rDNA-ITS2序列进行比较分析.结果 用ITS巢式PCR法检测AIDS患者99例,耶氏肺孢子虫DNA阳性43例,阳性率为43.4%(43/99),用GMS染色法检测,阳性率为4.04%(4/99),两者比较,有非常显著性差异(P<0.01).TA克隆112、185、200号病例的耶氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列长度分别为523bp、515bp、51lbp,三者之间的基因同源性为95%～97%,与GenBank登录的耶氏肺孢子虫(U07220)、(U07221)、(U07222)和(U07226)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因的同源性为95%～98%,其变异位点多在ITS1和ITS2基因片段.结论 ITS巢式PCR法检测耶氏肺孢子虫敏感性明显高于GMS染色法.ITS巢式PCR法可作为肺孢子虫肺炎早期诊断方法,尤其适用无创性标本的检测,CMS染色法对无创性标本痰液的检测敏感性低,在临床上意义不大;成功获取广西株耶氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基因序列,与GenBank登录的外国株耶氏肺孢子虫基因序列高度同源,其中5.8S rDNA高度保守,ITS1和ITS2基因变异较大.
目的 探討ITS巢式PCR檢測AIDS患者閤併耶氏肺孢子蟲感染的應用價值併對ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因進行剋隆測序.方法 收集AIDS患者痰液標本,用二硫囌糖醇(DTT)消化處理後進行六亞甲基四胺銀(CMS)染色鏡檢;提取肺孢子蟲DNA後進行巢式PCR擴增,選取GMS染色和PCR同時暘性的112號和僅PCR暘性的185、200號病例的PCR產物進行TA剋隆、測序,然後用Blastn程序和DNANAN軟件對所測序列進行同源性比較和序列間比對,併和GenBank登錄的耶氏肺孢子蟲ITS1-5.KS rDNA-ITS2序列進行比較分析.結果 用ITS巢式PCR法檢測AIDS患者99例,耶氏肺孢子蟲DNA暘性43例,暘性率為43.4%(43/99),用GMS染色法檢測,暘性率為4.04%(4/99),兩者比較,有非常顯著性差異(P<0.01).TA剋隆112、185、200號病例的耶氏肺孢子蟲ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列長度分彆為523bp、515bp、51lbp,三者之間的基因同源性為95%～97%,與GenBank登錄的耶氏肺孢子蟲(U07220)、(U07221)、(U07222)和(U07226)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因的同源性為95%～98%,其變異位點多在ITS1和ITS2基因片段.結論 ITS巢式PCR法檢測耶氏肺孢子蟲敏感性明顯高于GMS染色法.ITS巢式PCR法可作為肺孢子蟲肺炎早期診斷方法,尤其適用無創性標本的檢測,CMS染色法對無創性標本痰液的檢測敏感性低,在臨床上意義不大;成功穫取廣西株耶氏肺孢子蟲ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基因序列,與GenBank登錄的外國株耶氏肺孢子蟲基因序列高度同源,其中5.8S rDNA高度保守,ITS1和ITS2基因變異較大.
목적 탐토ITS소식PCR검측AIDS환자합병야씨폐포자충감염적응용개치병대ITS1-5.8S rDNA-ITS2기인진행극륭측서.방법 수집AIDS환자담액표본,용이류소당순(DTT)소화처리후진행륙아갑기사알은(CMS)염색경검;제취폐포자충DNA후진행소식PCR확증,선취GMS염색화PCR동시양성적112호화부PCR양성적185、200호병례적PCR산물진행TA극륭、측서,연후용Blastn정서화DNANAN연건대소측서렬진행동원성비교화서렬간비대,병화GenBank등록적야씨폐포자충ITS1-5.KS rDNA-ITS2서렬진행비교분석.결과 용ITS소식PCR법검측AIDS환자99례,야씨폐포자충DNA양성43례,양성솔위43.4%(43/99),용GMS염색법검측,양성솔위4.04%(4/99),량자비교,유비상현저성차이(P<0.01).TA극륭112、185、200호병례적야씨폐포자충ITS1-5.8S rDNA-ITS2기인서렬장도분별위523bp、515bp、51lbp,삼자지간적기인동원성위95%～97%,여GenBank등록적야씨폐포자충(U07220)、(U07221)、(U07222)화(U07226)적ITS1-5.8S rDNA-ITS2기인적동원성위95%～98%,기변이위점다재ITS1화ITS2기인편단.결론 ITS소식PCR법검측야씨폐포자충민감성명현고우GMS염색법.ITS소식PCR법가작위폐포자충폐염조기진단방법,우기괄용무창성표본적검측,CMS염색법대무창성표본담액적검측민감성저,재림상상의의불대;성공획취엄서주야씨폐포자충ITS1-5.8S rDNA-ITS2적기인서렬,여GenBank등록적외국주야씨폐포자충기인서렬고도동원,기중5.8S rDNA고도보수,ITS1화ITS2기인변이교대.
