中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2011年
20期
3697-3700
,共4页
柳铭%李章华%陈颖%王芳%夏伟%陈友浩%潘峰
柳銘%李章華%陳穎%王芳%夏偉%陳友浩%潘峰
류명%리장화%진영%왕방%하위%진우호%반봉
股骨头%抽提%总RNA%方法%组织工程
股骨頭%抽提%總RNA%方法%組織工程
고골두%추제%총RNA%방법%조직공정
背景:从骨组织中有效提取总RNA是进行骨科相关实验的基础,目前所知方法的提取效果不理想.目的:探寻一种高效、快速的骨组织总RNA提取方法.方法:取健康大耳白兔股骨头迅速置于用液氮预冷过的研钵中,液氮中反复研磨至粉末状,再将其移至预冷的匀浆器内,加入Trizol,充分匀浆后4 ℃离心,取上清,加入氯仿离心,使RNA与细胞DNA、蛋白质及其他成分分离从而得到总RNA.另取兔股骨头,按传统方法取材后保存,无匀浆过程,传统Trizol法提取总RNA作为对照.紫外分光光度计测定RNA样品浓度、纯度及产率.甲醛变性胶电泳观察RNA的28 S,18 S条带是否清晰,有无降解和DNA污染.结果与结论:实验方法提取的总RNA浓度在0.80～0.90 g/L,A260/A280在1.90～2.00之间,A260/A230在1.4～1.6之间,明显高于传统方法提取的RNA各指标,说明实验方法提取的总RNA纯度高,无DNA、蛋白质污染.甲醛变性胶电泳可清晰显示28 S,18 S两条带,大体观察其比例大约为1∶1,证实RNA提取完整,没有降解.由此可见,实验方法提取的骨组织总RNA质量高,提取方法方便、快捷,可用于骨组织分子生物学研究.
揹景:從骨組織中有效提取總RNA是進行骨科相關實驗的基礎,目前所知方法的提取效果不理想.目的:探尋一種高效、快速的骨組織總RNA提取方法.方法:取健康大耳白兔股骨頭迅速置于用液氮預冷過的研缽中,液氮中反複研磨至粉末狀,再將其移至預冷的勻漿器內,加入Trizol,充分勻漿後4 ℃離心,取上清,加入氯倣離心,使RNA與細胞DNA、蛋白質及其他成分分離從而得到總RNA.另取兔股骨頭,按傳統方法取材後保存,無勻漿過程,傳統Trizol法提取總RNA作為對照.紫外分光光度計測定RNA樣品濃度、純度及產率.甲醛變性膠電泳觀察RNA的28 S,18 S條帶是否清晰,有無降解和DNA汙染.結果與結論:實驗方法提取的總RNA濃度在0.80～0.90 g/L,A260/A280在1.90～2.00之間,A260/A230在1.4～1.6之間,明顯高于傳統方法提取的RNA各指標,說明實驗方法提取的總RNA純度高,無DNA、蛋白質汙染.甲醛變性膠電泳可清晰顯示28 S,18 S兩條帶,大體觀察其比例大約為1∶1,證實RNA提取完整,沒有降解.由此可見,實驗方法提取的骨組織總RNA質量高,提取方法方便、快捷,可用于骨組織分子生物學研究.
배경:종골조직중유효제취총RNA시진행골과상관실험적기출,목전소지방법적제취효과불이상.목적:탐심일충고효、쾌속적골조직총RNA제취방법.방법:취건강대이백토고골두신속치우용액담예랭과적연발중,액담중반복연마지분말상,재장기이지예랭적균장기내,가입Trizol,충분균장후4 ℃리심,취상청,가입록방리심,사RNA여세포DNA、단백질급기타성분분리종이득도총RNA.령취토고골두,안전통방법취재후보존,무균장과정,전통Trizol법제취총RNA작위대조.자외분광광도계측정RNA양품농도、순도급산솔.갑철변성효전영관찰RNA적28 S,18 S조대시부청석,유무강해화DNA오염.결과여결론:실험방법제취적총RNA농도재0.80～0.90 g/L,A260/A280재1.90～2.00지간,A260/A230재1.4～1.6지간,명현고우전통방법제취적RNA각지표,설명실험방법제취적총RNA순도고,무DNA、단백질오염.갑철변성효전영가청석현시28 S,18 S량조대,대체관찰기비례대약위1∶1,증실RNA제취완정,몰유강해.유차가견,실험방법제취적골조직총RNA질량고,제취방법방편、쾌첩,가용우골조직분자생물학연구.
