河北农业大学学报
河北農業大學學報
하북농업대학학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL UNIVERSITY OF HEBEI
2011年
6期
91-95
,共5页
左玉柱%王增利%郑丽丽%张占霞
左玉柱%王增利%鄭麗麗%張佔霞
좌옥주%왕증리%정려려%장점하
bp26基因%克隆%原核表达
bp26基因%剋隆%原覈錶達
bp26기인%극륭%원핵표체
根据GenBank中登录的牛型布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因序列,设计了1对引物,采用PCR技术,牛流产病例分泌物为模板,扩增bp26的编码基因,得到1条753 bp的片段.将其连入Simple-T载体中进行酶切和测序鉴定.测序正确后,将该基因插入到pET-28a(+)载体中构建原核表达载体,将此重组质粒转化到Rosetta(DE3)感受态细胞中,并用IPTG诱导,将诱导产物用SDS-PAGE和Western-blot检测.结果显示bp26基因可以在大肠杆菌中获得表达,表达产物分子质量约为29 ku,与预计的蛋白分子质量一致.Western-blot试验证明,该蛋白可以与患牛布氏杆菌的阳性血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性.
根據GenBank中登錄的牛型佈魯氏菌外膜蛋白bp26基因序列,設計瞭1對引物,採用PCR技術,牛流產病例分泌物為模闆,擴增bp26的編碼基因,得到1條753 bp的片段.將其連入Simple-T載體中進行酶切和測序鑒定.測序正確後,將該基因插入到pET-28a(+)載體中構建原覈錶達載體,將此重組質粒轉化到Rosetta(DE3)感受態細胞中,併用IPTG誘導,將誘導產物用SDS-PAGE和Western-blot檢測.結果顯示bp26基因可以在大腸桿菌中穫得錶達,錶達產物分子質量約為29 ku,與預計的蛋白分子質量一緻.Western-blot試驗證明,該蛋白可以與患牛佈氏桿菌的暘性血清產生特異性結閤反應,具有良好的抗原性.
근거GenBank중등록적우형포로씨균외막단백bp26기인서렬,설계료1대인물,채용PCR기술,우유산병례분비물위모판,확증bp26적편마기인,득도1조753 bp적편단.장기련입Simple-T재체중진행매절화측서감정.측서정학후,장해기인삽입도pET-28a(+)재체중구건원핵표체재체,장차중조질립전화도Rosetta(DE3)감수태세포중,병용IPTG유도,장유도산물용SDS-PAGE화Western-blot검측.결과현시bp26기인가이재대장간균중획득표체,표체산물분자질량약위29 ku,여예계적단백분자질량일치.Western-blot시험증명,해단백가이여환우포씨간균적양성혈청산생특이성결합반응,구유량호적항원성.
