山东医药
山東醫藥
산동의약
SHANDONG MEDICAL JOURNAL
2012年
33期
18-21
,共4页
张林%孔维信%孙怀鑫%丁露露%郝传明%陈靖
張林%孔維信%孫懷鑫%丁露露%郝傳明%陳靖
장림%공유신%손부흠%정로로%학전명%진정
足细胞%细胞凋亡%基因敲低
足細胞%細胞凋亡%基因敲低
족세포%세포조망%기인고저
目的 观察足细胞环氧合酶-2(COX-2)基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响,以进一步探讨足细胞凋亡的分子机制.方法 将条件永生性小鼠足细胞株随机分为阴性转染组、5 μL siRNA组、10 μL siRNA 组、15 μL siRNA组.经诱导分化成熟,在siRNA干扰48 h后用半定量RT-PCR和Western bolt分别检测足细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平.将10 μL siRNA组分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组三个亚组,用Western bolt检测podocin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平.结果 与阴性转染组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15 μL的siRNA组凋亡率明显增高.足细胞COX-2基因敲低组podocin蛋白表达显著低于足细胞阴性转染对照组(P＜0.05).与足细胞阴性转染对照组相比,足细胞COX-2基因敲低组BAX蛋白表达显著上调,而BCL-X1蛋白表达稍有下调.结论 敲低COX-2基因表达可以导致足细胞凋亡,且随着siRNA干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加.在干扰浓度为10μL时,足细胞podocin蛋白的表达下调.BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡.
目的 觀察足細胞環氧閤酶-2(COX-2)基因敲低對足細胞凋亡及podocin蛋白錶達的影響,以進一步探討足細胞凋亡的分子機製.方法 將條件永生性小鼠足細胞株隨機分為陰性轉染組、5 μL siRNA組、10 μL siRNA 組、15 μL siRNA組.經誘導分化成熟,在siRNA榦擾48 h後用半定量RT-PCR和Western bolt分彆檢測足細胞COX-2 mRNA及蛋白錶達水平,用流式細胞儀檢測足細胞凋亡水平.將10 μL siRNA組分彆設立足細胞正常對照組、足細胞COX-2基因敲低組和足細胞陰性轉染對照組三箇亞組,用Western bolt檢測podocin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的錶達水平.結果 與陰性轉染組比較,隨著榦擾濃度的增加,COX-2 mRNA及蛋白錶達逐漸減少,而足細胞的凋亡率逐漸升高,15 μL的siRNA組凋亡率明顯增高.足細胞COX-2基因敲低組podocin蛋白錶達顯著低于足細胞陰性轉染對照組(P＜0.05).與足細胞陰性轉染對照組相比,足細胞COX-2基因敲低組BAX蛋白錶達顯著上調,而BCL-X1蛋白錶達稍有下調.結論 敲低COX-2基因錶達可以導緻足細胞凋亡,且隨著siRNA榦擾濃度的增加,足細胞凋亡率逐漸增加.在榦擾濃度為10μL時,足細胞podocin蛋白的錶達下調.BAX蛋白上調及BCL-X1蛋白下調參與瞭足細胞的凋亡.
목적 관찰족세포배양합매-2(COX-2)기인고저대족세포조망급podocin단백표체적영향,이진일보탐토족세포조망적분자궤제.방법 장조건영생성소서족세포주수궤분위음성전염조、5 μL siRNA조、10 μL siRNA 조、15 μL siRNA조.경유도분화성숙,재siRNA간우48 h후용반정량RT-PCR화Western bolt분별검측족세포COX-2 mRNA급단백표체수평,용류식세포의검측족세포조망수평.장10 μL siRNA조분별설립족세포정상대조조、족세포COX-2기인고저조화족세포음성전염대조조삼개아조,용Western bolt검측podocin단백、BAX단백급BCL-X1단백적표체수평.결과 여음성전염조비교,수착간우농도적증가,COX-2 mRNA급단백표체축점감소,이족세포적조망솔축점승고,15 μL적siRNA조조망솔명현증고.족세포COX-2기인고저조podocin단백표체현저저우족세포음성전염대조조(P＜0.05).여족세포음성전염대조조상비,족세포COX-2기인고저조BAX단백표체현저상조,이BCL-X1단백표체초유하조.결론 고저COX-2기인표체가이도치족세포조망,차수착siRNA간우농도적증가,족세포조망솔축점증가.재간우농도위10μL시,족세포podocin단백적표체하조.BAX단백상조급BCL-X1단백하조삼여료족세포적조망.
