中华老年多器官疾病杂志
中華老年多器官疾病雜誌
중화노년다기관질병잡지
CHINESE JOURNAL OF MULTIPLE ORGAN DISEASES IN THE ELDERLY
2012年
4期
294-300
,共7页
白静%王一茹%刘丽凤%陈杰%苏绍萍%王禹
白靜%王一茹%劉麗鳳%陳傑%囌紹萍%王禹
백정%왕일여%류려봉%진걸%소소평%왕우
c-kit%羊水%间充质干细胞%心肌%细胞分化
c-kit%羊水%間充質榦細胞%心肌%細胞分化
c-kit%양수%간충질간세포%심기%세포분화
目的 比较人羊水来源c-kit+与c-kit-间充质干细胞的生物学特征及体外心肌分化能力.方法 通过常规产前诊断或自愿引产,以羊膜腔穿刺术获取14份孕中期羊水(15～31周),通过流式细胞仪分选c-kit+间充质干细胞,比较c-kit+干细胞与c-kit-干细胞的细胞形态及生长曲线.流式细胞仪及免疫细胞化学分析对两种细胞进行表型鉴定,比较其体外向成骨、成脂及心肌样细胞诱导分化能力.RT-PCR和Weston blot检测相关基因及蛋白的表达.结果 14份羊水标本中,有5份标本可以分选到c-kit+羊水干细胞,分布在孕16～22周,分选的细胞数量占贴壁细胞的(3.30±1.24)％.羊水干细胞以成纤维状为主,可以稳定传代,体外培养可增殖到50代以上.经过c-kit分选后,细胞呈均匀一致的长纤维状,排列规律.C-kit+及c -kit-羊水干细胞具有相似的生长曲线.两种细胞均具有间充质干细胞特征,表达间充质干细胞标记( CD29,CD44,CD73,CD90,CD105),不表达造血细胞系标记(CD34,CD45),表达Ⅰ类人类组织相容性抗原(HLA-ABC),不表达Ⅱ类人类组织相容性抗原(HLA-DR).Oct-4及SSEA-4胚胎干细胞标记在c-kit+干细胞的表达比率明显高于c-kit-干细胞.两种细胞在体外均可以向成脂细胞、成骨细胞分化.成脂细胞诱导后,可以看到细胞内脂滴聚集,油红O染色阳性.成骨细胞诱导后,可以看到钙盐沉积,Von Kossa染色阳性.两种细胞分别与新生乳鼠心肌共培养,体外向心肌细胞诱导,c-kit+羊水干细胞可以检测到GATA-4,α-actin,Cx43和cTnT基因及蛋白的表达.而c-kit-干细胞在诱导后只表达GATA-4的基因及蛋白.结论 羊水来源c-kit+及c-kit-干细胞均表达间充质干细胞表型特征,体外可以向成脂、成骨细胞分化.然而,c-kit+干细胞的心肌样细胞分化能力明显强于c-kit干细胞,可能与c-kit+干细胞具有某些胚胎干细胞特征有关.
目的 比較人羊水來源c-kit+與c-kit-間充質榦細胞的生物學特徵及體外心肌分化能力.方法 通過常規產前診斷或自願引產,以羊膜腔穿刺術穫取14份孕中期羊水(15～31週),通過流式細胞儀分選c-kit+間充質榦細胞,比較c-kit+榦細胞與c-kit-榦細胞的細胞形態及生長麯線.流式細胞儀及免疫細胞化學分析對兩種細胞進行錶型鑒定,比較其體外嚮成骨、成脂及心肌樣細胞誘導分化能力.RT-PCR和Weston blot檢測相關基因及蛋白的錶達.結果 14份羊水標本中,有5份標本可以分選到c-kit+羊水榦細胞,分佈在孕16～22週,分選的細胞數量佔貼壁細胞的(3.30±1.24)％.羊水榦細胞以成纖維狀為主,可以穩定傳代,體外培養可增殖到50代以上.經過c-kit分選後,細胞呈均勻一緻的長纖維狀,排列規律.C-kit+及c -kit-羊水榦細胞具有相似的生長麯線.兩種細胞均具有間充質榦細胞特徵,錶達間充質榦細胞標記( CD29,CD44,CD73,CD90,CD105),不錶達造血細胞繫標記(CD34,CD45),錶達Ⅰ類人類組織相容性抗原(HLA-ABC),不錶達Ⅱ類人類組織相容性抗原(HLA-DR).Oct-4及SSEA-4胚胎榦細胞標記在c-kit+榦細胞的錶達比率明顯高于c-kit-榦細胞.兩種細胞在體外均可以嚮成脂細胞、成骨細胞分化.成脂細胞誘導後,可以看到細胞內脂滴聚集,油紅O染色暘性.成骨細胞誘導後,可以看到鈣鹽沉積,Von Kossa染色暘性.兩種細胞分彆與新生乳鼠心肌共培養,體外嚮心肌細胞誘導,c-kit+羊水榦細胞可以檢測到GATA-4,α-actin,Cx43和cTnT基因及蛋白的錶達.而c-kit-榦細胞在誘導後隻錶達GATA-4的基因及蛋白.結論 羊水來源c-kit+及c-kit-榦細胞均錶達間充質榦細胞錶型特徵,體外可以嚮成脂、成骨細胞分化.然而,c-kit+榦細胞的心肌樣細胞分化能力明顯彊于c-kit榦細胞,可能與c-kit+榦細胞具有某些胚胎榦細胞特徵有關.
목적 비교인양수래원c-kit+여c-kit-간충질간세포적생물학특정급체외심기분화능력.방법 통과상규산전진단혹자원인산,이양막강천자술획취14빈잉중기양수(15～31주),통과류식세포의분선c-kit+간충질간세포,비교c-kit+간세포여c-kit-간세포적세포형태급생장곡선.류식세포의급면역세포화학분석대량충세포진행표형감정,비교기체외향성골、성지급심기양세포유도분화능력.RT-PCR화Weston blot검측상관기인급단백적표체.결과 14빈양수표본중,유5빈표본가이분선도c-kit+양수간세포,분포재잉16～22주,분선적세포수량점첩벽세포적(3.30±1.24)％.양수간세포이성섬유상위주,가이은정전대,체외배양가증식도50대이상.경과c-kit분선후,세포정균균일치적장섬유상,배렬규률.C-kit+급c -kit-양수간세포구유상사적생장곡선.량충세포균구유간충질간세포특정,표체간충질간세포표기( CD29,CD44,CD73,CD90,CD105),불표체조혈세포계표기(CD34,CD45),표체Ⅰ류인류조직상용성항원(HLA-ABC),불표체Ⅱ류인류조직상용성항원(HLA-DR).Oct-4급SSEA-4배태간세포표기재c-kit+간세포적표체비솔명현고우c-kit-간세포.량충세포재체외균가이향성지세포、성골세포분화.성지세포유도후,가이간도세포내지적취집,유홍O염색양성.성골세포유도후,가이간도개염침적,Von Kossa염색양성.량충세포분별여신생유서심기공배양,체외향심기세포유도,c-kit+양수간세포가이검측도GATA-4,α-actin,Cx43화cTnT기인급단백적표체.이c-kit-간세포재유도후지표체GATA-4적기인급단백.결론 양수래원c-kit+급c-kit-간세포균표체간충질간세포표형특정,체외가이향성지、성골세포분화.연이,c-kit+간세포적심기양세포분화능력명현강우c-kit간세포,가능여c-kit+간세포구유모사배태간세포특정유관.
