CAJ | 학술논문

本研究探讨不同二维电泳条件对人急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞株NB4二维电泳结果的影响.选用24 cm,pH3-10L的固定pH梯度(immobilized pHgradient,IPG)胶条,用IPGphor进行第一相等电聚焦,然后用Ettan Dalt Ⅱ垂直电泳系统进行第二相SDS-PAGE,银染后用ImageMaster 2D Elite软件进行分析.结果表明:采用低离子强度的缓冲液冲洗收集样品可以提高等电聚焦效果.裂解液中7 mol/L尿素、40 mmol/L DTT能溶解NB4细胞大部分蛋白质,而水化液中硫脲与尿素合用可以明显增加碱性端中低分子量区可分辨的蛋白质点.NB4细胞用24 cm,pH3-10L的IPG胶条进行二维电泳时,100μg左右的上样量、63 200V小时左右的等电聚焦时间是恰当的.结论:APL细胞的蛋白质种类繁多,受多种因素影响,正确选择样品制备方法和二维电泳条件十分重要.
본연구탐토불동이유전영조건대인급성조유립세포성백혈병(APL)세포주NB4이유전영결과적영향.선용24 cm,pH3-10L적고정pH제도(immobilized pHgradient,IPG)효조,용IPGphor진행제일상등전취초,연후용Ettan Dalt Ⅱ수직전영계통진행제이상SDS-PAGE,은염후용ImageMaster 2D Elite연건진행분석.결과표명:채용저리자강도적완충액충세수집양품가이제고등전취초효과.렬해액중7 mol/L뇨소、40 mmol/L DTT능용해NB4세포대부분단백질,이수화액중류뇨여뇨소합용가이명현증가감성단중저분자량구가분변적단백질점.NB4세포용24 cm,pH3-10L적IPG효조진행이유전영시,100μg좌우적상양량、63 200V소시좌우적등전취초시간시흡당적.결론:APL세포적단백질충류번다,수다충인소영향,정학선택양품제비방법화이유전영조건십분중요.