上海第二医科大学学报
上海第二醫科大學學報
상해제이의과대학학보
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS SECONDAE SHANGHAI
2005年
2期
151-154
,共4页
尹桂芝%李彪%张一帆%尤蓓%赵龙%陆林%于金德
尹桂芝%李彪%張一帆%尤蓓%趙龍%陸林%于金德
윤계지%리표%장일범%우배%조룡%륙림%우금덕
人纤溶酶原Kringle5%质粒构建%蛋白纯化
人纖溶酶原Kringle5%質粒構建%蛋白純化
인섬용매원Kringle5%질립구건%단백순화
目的克隆人纤溶酶原Kringle5(K5)区基因,并进行重组蛋白的表达纯化及活性鉴定.方法用PCR方法从正常成人肝cDNA库扩增出人纤溶酶原K5区基因,构建K5的原核表达载体pET-22b(+)-K5-6×His,IPTG诱导蛋白表达后经Ni+-树脂亲和层析进行纯化,通过血管内皮细胞增殖抑制试验检测蛋白活性.结果经PCR成功扩增出了243 bp的K5区基因,测序正确后克隆进大肠杆菌分泌型表达载体pET-22b(+),重组质粒在BL21中成功表达出分子量为14 000的蛋白质,纯化后的蛋白纯度达95%,具有抑制血管内皮细胞增殖活性的功能,K5蛋白浓度为4 μg/mL时抑制率达50%.结论纤溶酶原K5的成功克隆、表达及纯化可能在肿瘤和动脉粥样硬化的抗血管生成治疗中具有一定作用.
目的剋隆人纖溶酶原Kringle5(K5)區基因,併進行重組蛋白的錶達純化及活性鑒定.方法用PCR方法從正常成人肝cDNA庫擴增齣人纖溶酶原K5區基因,構建K5的原覈錶達載體pET-22b(+)-K5-6×His,IPTG誘導蛋白錶達後經Ni+-樹脂親和層析進行純化,通過血管內皮細胞增殖抑製試驗檢測蛋白活性.結果經PCR成功擴增齣瞭243 bp的K5區基因,測序正確後剋隆進大腸桿菌分泌型錶達載體pET-22b(+),重組質粒在BL21中成功錶達齣分子量為14 000的蛋白質,純化後的蛋白純度達95%,具有抑製血管內皮細胞增殖活性的功能,K5蛋白濃度為4 μg/mL時抑製率達50%.結論纖溶酶原K5的成功剋隆、錶達及純化可能在腫瘤和動脈粥樣硬化的抗血管生成治療中具有一定作用.
목적극륭인섬용매원Kringle5(K5)구기인,병진행중조단백적표체순화급활성감정.방법용PCR방법종정상성인간cDNA고확증출인섬용매원K5구기인,구건K5적원핵표체재체pET-22b(+)-K5-6×His,IPTG유도단백표체후경Ni+-수지친화층석진행순화,통과혈관내피세포증식억제시험검측단백활성.결과경PCR성공확증출료243 bp적K5구기인,측서정학후극륭진대장간균분비형표체재체pET-22b(+),중조질립재BL21중성공표체출분자량위14 000적단백질,순화후적단백순도체95%,구유억제혈관내피세포증식활성적공능,K5단백농도위4 μg/mL시억제솔체50%.결론섬용매원K5적성공극륭、표체급순화가능재종류화동맥죽양경화적항혈관생성치료중구유일정작용.
