免疫学杂志
免疫學雜誌
면역학잡지
IMMUNOLOGICAL JOURNAL
2006年
4期
460-462,465
,共4页
郭薇%张建琼%沈传来%孟凡岩
郭薇%張建瓊%瀋傳來%孟凡巖
곽미%장건경%침전래%맹범암
克隆%β2m%基因表达%纯化
剋隆%β2m%基因錶達%純化
극륭%β2m%기인표체%순화
目的获得大量有活性的人β2m重组蛋白,为构建HLA与抗原肽的复合体及HLA四聚体作准备.方法采用RT-PCR克隆法构建重组质粒,于BL21(DE3)菌中原核表达后,经金属螯合亲和层析纯化,BCA Protein Assay Kit测定蛋白含量,应用SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况及Western blot分析重组抗原的活性.结果成功地构建了两种融合表达载体PET-22b/β2m及PET-28a/β2m,两者的表达量分别为5～10 mg/L,40～80 mg/L,纯度均为95%.结论通过比较,确定了β2m最佳表达载体系统及表达条件,为研究轻链在原核系统中表达、纯化以及构建HLA复合体,探讨免疫识别机制奠定了基础.
目的穫得大量有活性的人β2m重組蛋白,為構建HLA與抗原肽的複閤體及HLA四聚體作準備.方法採用RT-PCR剋隆法構建重組質粒,于BL21(DE3)菌中原覈錶達後,經金屬螯閤親和層析純化,BCA Protein Assay Kit測定蛋白含量,應用SDS-PAGE觀察重組蛋白錶達情況及Western blot分析重組抗原的活性.結果成功地構建瞭兩種融閤錶達載體PET-22b/β2m及PET-28a/β2m,兩者的錶達量分彆為5～10 mg/L,40～80 mg/L,純度均為95%.結論通過比較,確定瞭β2m最佳錶達載體繫統及錶達條件,為研究輕鏈在原覈繫統中錶達、純化以及構建HLA複閤體,探討免疫識彆機製奠定瞭基礎.
목적획득대량유활성적인β2m중조단백,위구건HLA여항원태적복합체급HLA사취체작준비.방법채용RT-PCR극륭법구건중조질립,우BL21(DE3)균중원핵표체후,경금속오합친화층석순화,BCA Protein Assay Kit측정단백함량,응용SDS-PAGE관찰중조단백표체정황급Western blot분석중조항원적활성.결과성공지구건료량충융합표체재체PET-22b/β2m급PET-28a/β2m,량자적표체량분별위5～10 mg/L,40～80 mg/L,순도균위95%.결론통과비교,학정료β2m최가표체재체계통급표체조건,위연구경련재원핵계통중표체、순화이급구건HLA복합체,탐토면역식별궤제전정료기출.
