基础医学与临床
基礎醫學與臨床
기출의학여림상
BASIC MEDICAL SCIENCES AND CLINICS
2006年
7期
704-709
,共6页
孙妍琳%周庚寅%孙建国%林晓燕%李红%白艳花%张翠娟
孫妍琳%週庚寅%孫建國%林曉燕%李紅%白豔花%張翠娟
손연림%주경인%손건국%림효연%리홍%백염화%장취연
短发夹状RNA%乳腺癌%葡萄糖神经酰胺合成酶%凋亡
短髮夾狀RNA%乳腺癌%葡萄糖神經酰胺閤成酶%凋亡
단발협상RNA%유선암%포도당신경선알합성매%조망
目的构建葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因的短发夹状RNA(shRNA),观察其对人耐药乳腺癌细胞GCS表达的抑制及多药耐药的逆转作用.方法设计2对GCS基因编码的反向重复序列,中间间隔6个nt,体外合成并克隆至载体pSUPER.转染乳腺癌细胞,Western blot和免疫细胞化学方法测定GCS表达.Western blot、比色法检测细胞内caspase-3的表达,流式细胞仪分析细胞凋亡率.四氮唑盐(MTT)法检测半数细胞抑制浓度.结果酶切和DNA测序证实重组质粒构建成功.转染后GCS蛋白含量分别下降80%和82%,GCS表达阳性率降低为18.1%和16.7%.caspase-3表达和活性均显著增强,细胞凋亡率明显增加,细胞对化疗药物耐药性有明显下降.结论shRNA可有效抑制人耐药乳腺癌细胞中GCS表达,并可提高其对多种化疗药物的敏感性.
目的構建葡萄糖神經酰胺閤成酶(GCS)基因的短髮夾狀RNA(shRNA),觀察其對人耐藥乳腺癌細胞GCS錶達的抑製及多藥耐藥的逆轉作用.方法設計2對GCS基因編碼的反嚮重複序列,中間間隔6箇nt,體外閤成併剋隆至載體pSUPER.轉染乳腺癌細胞,Western blot和免疫細胞化學方法測定GCS錶達.Western blot、比色法檢測細胞內caspase-3的錶達,流式細胞儀分析細胞凋亡率.四氮唑鹽(MTT)法檢測半數細胞抑製濃度.結果酶切和DNA測序證實重組質粒構建成功.轉染後GCS蛋白含量分彆下降80%和82%,GCS錶達暘性率降低為18.1%和16.7%.caspase-3錶達和活性均顯著增彊,細胞凋亡率明顯增加,細胞對化療藥物耐藥性有明顯下降.結論shRNA可有效抑製人耐藥乳腺癌細胞中GCS錶達,併可提高其對多種化療藥物的敏感性.
목적구건포도당신경선알합성매(GCS)기인적단발협상RNA(shRNA),관찰기대인내약유선암세포GCS표체적억제급다약내약적역전작용.방법설계2대GCS기인편마적반향중복서렬,중간간격6개nt,체외합성병극륭지재체pSUPER.전염유선암세포,Western blot화면역세포화학방법측정GCS표체.Western blot、비색법검측세포내caspase-3적표체,류식세포의분석세포조망솔.사담서염(MTT)법검측반수세포억제농도.결과매절화DNA측서증실중조질립구건성공.전염후GCS단백함량분별하강80%화82%,GCS표체양성솔강저위18.1%화16.7%.caspase-3표체화활성균현저증강,세포조망솔명현증가,세포대화료약물내약성유명현하강.결론shRNA가유효억제인내약유선암세포중GCS표체,병가제고기대다충화료약물적민감성.
