郑州大学学报（医学版）
鄭州大學學報（醫學版）
정주대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2008年
2期
231-234
,共4页
陈辉%马慧洁%张艳%乐晓萍%张钦宪
陳輝%馬慧潔%張豔%樂曉萍%張欽憲
진휘%마혜길%장염%악효평%장흠헌
SV40T抗原%胃癌%真核载体
SV40T抗原%胃癌%真覈載體
SV40T항원%위암%진핵재체
目的:构建SV40T抗原的特异性真核表达载体,并导入胃癌细胞株SGC7901进行表达鉴定.方法:扩增小鼠H+/K+ATPase β亚基启动子,与pMT18-T载体相连,并将其亚克隆至真核表达载体 pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)/HK; 从含有SV40T基因的pLITAg质粒酶切回收SV40T基因,与pcDNA3.1(-)/HK相连,构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV,同时构建非特异性表达载体pcDNA3.1(-)/SV,进行酶切及测序鉴定.用脂质体转染的方法将构建的载体导入胃癌细胞株SGC7901,PCR扩增基因组DNA,RT-PCR检测SV40T mRNA的表达.结果:限制性内切酶分析与测序结果显示,真核表达载体pcDNA3.1/HKSK构建成功;转染该载体的SGC7901细胞可检测到SV40T基因DNA的存在,且有SV40T mRNA的表达.结论:特异性表达SV40T基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV构建成功.
目的:構建SV40T抗原的特異性真覈錶達載體,併導入胃癌細胞株SGC7901進行錶達鑒定.方法:擴增小鼠H+/K+ATPase β亞基啟動子,與pMT18-T載體相連,併將其亞剋隆至真覈錶達載體 pcDNA3.1(-),構建pcDNA3.1(-)/HK; 從含有SV40T基因的pLITAg質粒酶切迴收SV40T基因,與pcDNA3.1(-)/HK相連,構建胃壁細胞特異性錶達載體pcDNA3.1(-)/HKSV,同時構建非特異性錶達載體pcDNA3.1(-)/SV,進行酶切及測序鑒定.用脂質體轉染的方法將構建的載體導入胃癌細胞株SGC7901,PCR擴增基因組DNA,RT-PCR檢測SV40T mRNA的錶達.結果:限製性內切酶分析與測序結果顯示,真覈錶達載體pcDNA3.1/HKSK構建成功;轉染該載體的SGC7901細胞可檢測到SV40T基因DNA的存在,且有SV40T mRNA的錶達.結論:特異性錶達SV40T基因的真覈錶達載體pcDNA3.1(-)/HKSV構建成功.
목적:구건SV40T항원적특이성진핵표체재체,병도입위암세포주SGC7901진행표체감정.방법:확증소서H+/K+ATPase β아기계동자,여pMT18-T재체상련,병장기아극륭지진핵표체재체 pcDNA3.1(-),구건pcDNA3.1(-)/HK; 종함유SV40T기인적pLITAg질립매절회수SV40T기인,여pcDNA3.1(-)/HK상련,구건위벽세포특이성표체재체pcDNA3.1(-)/HKSV,동시구건비특이성표체재체pcDNA3.1(-)/SV,진행매절급측서감정.용지질체전염적방법장구건적재체도입위암세포주SGC7901,PCR확증기인조DNA,RT-PCR검측SV40T mRNA적표체.결과:한제성내절매분석여측서결과현시,진핵표체재체pcDNA3.1/HKSK구건성공;전염해재체적SGC7901세포가검측도SV40T기인DNA적존재,차유SV40T mRNA적표체.결론:특이성표체SV40T기인적진핵표체재체pcDNA3.1(-)/HKSV구건성공.
