CAJ | 학술논문

背景与目的已有的研究表明,nm23-H1基因是一个重要的肺癌转移抑制基因,为了筛选与该基因表达相关的差异表达基因.本研究拟构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆与nm23-H1转移相关的基因奠定基础.方法利用抑制消减杂交(suppressive subtractive hybridization,SSH)技术构建nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)间差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库,经蓝白菌落筛选克隆,并PCR反应鉴定.结果成功构建了该两株细胞株差异表达基因的正向和反向消减cDNA文库.经蓝白菌落筛选,正向消减文库总共获得约300个白斑克隆,反向消减文库总共获得约400个白斑克隆,从正反向消减文库中各挑选96个克隆进行PCR扩增检测是否有插入片段,结果显示在挑选的正向文库中有84个克隆有插入片段,反向文库中有83个克隆有插入片段.其片段大小范围为(300-750)bp.结论抑制消减杂交是克隆差异表达基因的有效方法,我们应用SSH法和T/A克隆技术成功建立了nm23-H1基因转染前后人大细胞肺癌细胞株(L9981和L9981-nm23-H1)差异表达基因的抑制消减cDNA文库.nm23-H1基因在肺癌细胞中的表达可能影响某些转移相关基因的差异表达.
배경여목적 이유적연구표명,nm23-H1기인시일개중요적폐암전이억제기인,위료사선여해기인표체상관적차이표체기인.본연구의구건nm23-H1기인전염전후인대세포폐암세포주(L9981화L9981-nm23-H1)차이표체기인적억제소감cDNA문고,위진일보사선、극륭여nm23-H1전이상관적기인전정기출.방법이용억제소감잡교(suppressive subtractive hybridization,SSH)기술구건nm23-H1기인전염전후인대세포폐암세포주(L9981화L9981-nm23-H1)간차이표체기인적정향화반향소감cDNA문고,경람백균락사선극륭,병PCR반응감정.결과 성공구건료해량주세포주차이표체기인적정향화반향소감cDNA문고.경람백균락사선,정향소감문고총공획득약300개백반극륭,반향소감문고총공획득약400개백반극륭,종정반향소감문고중각도선96개극륭진행PCR확증검측시부유삽입편단,결과현시재도선적정향문고중유84개극륭유삽입편단,반향문고중유83개극륭유삽입편단.기편단대소범위위(300-750)bp.결론 억제소감잡교시극륭차이표체기인적유효방법,아문응용SSH법화T/A극륭기술성공건립료nm23-H1기인전염전후인대세포폐암세포주(L9981화L9981-nm23-H1)차이표체기인적억제소감cDNA문고.nm23-H1기인재폐암세포중적표체가능영향모사전이상관기인적차이표체.