中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2008年
11期
1262-1265
,共4页
刘惠莉%周宗清%邢继兰%潘洁%杨秋峰%饶柏忠
劉惠莉%週宗清%邢繼蘭%潘潔%楊鞦峰%饒柏忠
류혜리%주종청%형계란%반길%양추봉%요백충
猪流感病毒%血凝素亚型%神经氨酸酶亚型%多重RT-PCR
豬流感病毒%血凝素亞型%神經氨痠酶亞型%多重RT-PCR
저류감병독%혈응소아형%신경안산매아형%다중RT-PCR
根据GenBank登录的猪流感病毒各血清亚型NP基因,H1、H3亚型HA基因,N1、N2亚型NA基因核苷酸序列,经DNAstar软件类比选择保守区设计引物,sPCR筛选出引物对,用于扩增猪流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亚型、神经氨酸酶N1/N2亚型基因片段.根据NP、H1N1、H3N2亚型引物扩增片段大小和反应条件的差异,将各引物配比组合,形成引物组合,建立多重RT-PCR体系.经对不同亚型模板的扩增、检验,建立的2个多重RT-PCR体系可用于猪流感病毒及H1/H3血凝素亚型、N1/N2神经氨酸酶亚型的快速鉴别、诊断.特异性试验检测多重RT-PCR不能扩增其他猪病毒核酸,核酸的最低检测量达0.2 ng.采集临床具有呼吸道症状的猪肺、鼻腔棉试子等85份,与鸡胚分离及血凝/血凝抑制试验比较,阴性样品检测符合率达100%.
根據GenBank登錄的豬流感病毒各血清亞型NP基因,H1、H3亞型HA基因,N1、N2亞型NA基因覈苷痠序列,經DNAstar軟件類比選擇保守區設計引物,sPCR篩選齣引物對,用于擴增豬流感病毒NP基因、血凝素H1/H3亞型、神經氨痠酶N1/N2亞型基因片段.根據NP、H1N1、H3N2亞型引物擴增片段大小和反應條件的差異,將各引物配比組閤,形成引物組閤,建立多重RT-PCR體繫.經對不同亞型模闆的擴增、檢驗,建立的2箇多重RT-PCR體繫可用于豬流感病毒及H1/H3血凝素亞型、N1/N2神經氨痠酶亞型的快速鑒彆、診斷.特異性試驗檢測多重RT-PCR不能擴增其他豬病毒覈痠,覈痠的最低檢測量達0.2 ng.採集臨床具有呼吸道癥狀的豬肺、鼻腔棉試子等85份,與鷄胚分離及血凝/血凝抑製試驗比較,陰性樣品檢測符閤率達100%.
근거GenBank등록적저류감병독각혈청아형NP기인,H1、H3아형HA기인,N1、N2아형NA기인핵감산서렬,경DNAstar연건류비선택보수구설계인물,sPCR사선출인물대,용우확증저류감병독NP기인、혈응소H1/H3아형、신경안산매N1/N2아형기인편단.근거NP、H1N1、H3N2아형인물확증편단대소화반응조건적차이,장각인물배비조합,형성인물조합,건립다중RT-PCR체계.경대불동아형모판적확증、검험,건립적2개다중RT-PCR체계가용우저류감병독급H1/H3혈응소아형、N1/N2신경안산매아형적쾌속감별、진단.특이성시험검측다중RT-PCR불능확증기타저병독핵산,핵산적최저검측량체0.2 ng.채집림상구유호흡도증상적저폐、비강면시자등85빈,여계배분리급혈응/혈응억제시험비교,음성양품검측부합솔체100%.
