生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2009年
1期
1-3
,共3页
刘先凯%高美琴%孙忠科%冯尔玲%朱力%王恒樑
劉先凱%高美琴%孫忠科%馮爾玲%硃力%王恆樑
류선개%고미금%손충과%풍이령%주력%왕항량
弗氏2a志贺氏菌2457T株%YciD蛋白%融合蛋白%表达%纯化
弗氏2a誌賀氏菌2457T株%YciD蛋白%融閤蛋白%錶達%純化
불씨2a지하씨균2457T주%YciD단백%융합단백%표체%순화
目的:原核表达重组弗氏2a志贺氏菌2457T株YeiD蛋白,为其功能研究奠定基础.方法:用PCR方法从弗氏2a志贺氏菌2457T株染色体中扩增YciD蛋白编码序列,经过纯化、酶切后克隆到原核表达载体pET32a中,构建重组载体pET32a-yciD,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株获得工程菌株,对其表达和纯化条件进行优化;利用Western Blot检测融合蛋白的表达.结果:构建了YciD蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的YeiD蛋白;Western Blot表明,此蛋白可与His标签抗体反应,表明获得了目的蛋白.结论:在原核表达系统中表达、纯化弗氏2a志贺氏菌2457T株YciD蛋白,为进一步对其进行功能研究奠定了基础.
目的:原覈錶達重組弗氏2a誌賀氏菌2457T株YeiD蛋白,為其功能研究奠定基礎.方法:用PCR方法從弗氏2a誌賀氏菌2457T株染色體中擴增YciD蛋白編碼序列,經過純化、酶切後剋隆到原覈錶達載體pET32a中,構建重組載體pET32a-yciD,轉化大腸桿菌BL21(DE3)菌株穫得工程菌株,對其錶達和純化條件進行優化;利用Western Blot檢測融閤蛋白的錶達.結果:構建瞭YciD蛋白的融閤錶達載體,併在大腸桿菌中穫得高效錶達;經Ni-NTA親和層析柱純化穫得瞭高純度的YeiD蛋白;Western Blot錶明,此蛋白可與His標籤抗體反應,錶明穫得瞭目的蛋白.結論:在原覈錶達繫統中錶達、純化弗氏2a誌賀氏菌2457T株YciD蛋白,為進一步對其進行功能研究奠定瞭基礎.
목적:원핵표체중조불씨2a지하씨균2457T주YeiD단백,위기공능연구전정기출.방법:용PCR방법종불씨2a지하씨균2457T주염색체중확증YciD단백편마서렬,경과순화、매절후극륭도원핵표체재체pET32a중,구건중조재체pET32a-yciD,전화대장간균BL21(DE3)균주획득공정균주,대기표체화순화조건진행우화;이용Western Blot검측융합단백적표체.결과:구건료YciD단백적융합표체재체,병재대장간균중획득고효표체;경Ni-NTA친화층석주순화획득료고순도적YeiD단백;Western Blot표명,차단백가여His표첨항체반응,표명획득료목적단백.결론:재원핵표체계통중표체、순화불씨2a지하씨균2457T주YciD단백,위진일보대기진행공능연구전정료기출.
