南京农业大学学报
南京農業大學學報
남경농업대학학보
JOURNAL OF NANJING AGRICULTURAL UNIVERSITY
2010年
1期
54-58
,共5页
李培培%张皛%潘小玫%王金生%宋从凤
李培培%張皛%潘小玫%王金生%宋從鳳
리배배%장효%반소매%왕금생%송종봉
小麦%TA3-13%His融合表达%纯化%TMV抗性
小麥%TA3-13%His融閤錶達%純化%TMV抗性
소맥%TA3-13%His융합표체%순화%TMV항성
TA3-13是小麦中一个冷胁迫蛋白WCSP1编码基因的5'端截短的DNA序列.它与水稻白叶枯病菌Harpin蛋白的编码基因hpa1Xoo(又称hrf1,hrfa)具有59%的一致性.为了研究TA3-13蛋白的生物学性状和功能及其与Harpin蛋白的关系,本研究以pET30a(+)为载体,构建了His融合表达重组体,转化大肠杆菌后在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)和阿拉伯糖的诱导下获得了融合蛋白的表达.利用镍柱对融合蛋白进行了纯化研究,结果表明:融合蛋白在200 mmol·L-1咪唑浓度下能够被有效地洗脱下来,电泳显示具有单一条带.烟草花叶病毒(TMV)接种试验显示:纯化的TA3-13蛋白喷雾烟草后仍具有较高的诱导烟草抗TMV的作用.
TA3-13是小麥中一箇冷脅迫蛋白WCSP1編碼基因的5'耑截短的DNA序列.它與水稻白葉枯病菌Harpin蛋白的編碼基因hpa1Xoo(又稱hrf1,hrfa)具有59%的一緻性.為瞭研究TA3-13蛋白的生物學性狀和功能及其與Harpin蛋白的關繫,本研究以pET30a(+)為載體,構建瞭His融閤錶達重組體,轉化大腸桿菌後在異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)和阿拉伯糖的誘導下穫得瞭融閤蛋白的錶達.利用鎳柱對融閤蛋白進行瞭純化研究,結果錶明:融閤蛋白在200 mmol·L-1咪唑濃度下能夠被有效地洗脫下來,電泳顯示具有單一條帶.煙草花葉病毒(TMV)接種試驗顯示:純化的TA3-13蛋白噴霧煙草後仍具有較高的誘導煙草抗TMV的作用.
TA3-13시소맥중일개랭협박단백WCSP1편마기인적5'단절단적DNA서렬.타여수도백협고병균Harpin단백적편마기인hpa1Xoo(우칭hrf1,hrfa)구유59%적일치성.위료연구TA3-13단백적생물학성상화공능급기여Harpin단백적관계,본연구이pET30a(+)위재체,구건료His융합표체중조체,전화대장간균후재이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)화아랍백당적유도하획득료융합단백적표체.이용얼주대융합단백진행료순화연구,결과표명:융합단백재200 mmol·L-1미서농도하능구피유효지세탈하래,전영현시구유단일조대.연초화협병독(TMV)접충시험현시:순화적TA3-13단백분무연초후잉구유교고적유도연초항TMV적작용.
