农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2011年
5期
932-937
,共6页
何晓明%束长龙%刘晓垒%李海涛%高继国%张杰%宋福平
何曉明%束長龍%劉曉壘%李海濤%高繼國%張傑%宋福平
하효명%속장룡%류효루%리해도%고계국%장걸%송복평
苏云金芽胞杆菌%克隆%活性%Vip3
囌雲金芽胞桿菌%剋隆%活性%Vip3
소운금아포간균%극륭%활성%Vip3
为了发掘新型vip3基因,本研究采用PCR和高分辨熔解曲线的方法对72株菌株中vip3基因进行了鉴定和分析,结果表明,有18株菌呈阳性,分别含有vip3Aa、vip3Af和vip3Ba共3类vip3基因.根据已知vip3基因的全长序列设计引物,以菌株T03B001(B.thuringiensis subsp.sumiyoshiensis的总DNA为模板扩增出长为2.37 kb的全长基因,插入表达载体pEB,转化大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta (DE3)菌株,在低温条件下经IPTG诱导后,表达88 kD的蛋白,该蛋白由789个氨基酸组成,与已知的Vip3Aa氨基酸一致性为96％,已被国际Bt命名委员会正式命名为Vip3Aa39,GenBank登录号为HMI17631.Vip3Aa39蛋白与本实验室此前获得的Vip3Aall蛋白进行比较,发现两者存在39个氨基酸的差异.两种蛋白的表达产物采用饲喂法分别对小地老虎(A grotis ipsilon)、小菜蛾(Plutella xylostella)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)和甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)的杀虫活性进行了测定,结果表明,Vip3Aa39对小地老虎有较高的杀虫活性,50％致死浓度(LC50)为5.43 μg/mL,而Vip3Aa11的LC50为73.62 μg/mL; Vip3Aa39对小菜蛾具有较高的杀虫活性,LC50为140.64 μg/mL,而Vip3Aa11对小菜蛾杀虫活性极低；Vip3Aa11对棉铃虫具有较高的杀虫活性,LC50为35.18 μg/mL,而Vip3Aa39的LC50仅为286.99 μg/mL; Vip3Aa39和Vip3Aa11均对甜菜夜蛾具有高毒力,LC50分别为2.02和2.04 μg/mL.以上结果说明Vip3Aa39与Vip3Aa11对小地老虎、小菜蛾和棉铃虫的杀虫活性显著不同.Vip3Aa39对小地老虎和小菜蛾的毒力比Vip3Aa11高,而对棉铃虫的毒力明显低于Vip3Aa11.Vip3Aa39的发现将为重要农业害虫的防治提供更多的选择,为进一步研究Vip3蛋白结构和杀虫机理提供了材料.
為瞭髮掘新型vip3基因,本研究採用PCR和高分辨鎔解麯線的方法對72株菌株中vip3基因進行瞭鑒定和分析,結果錶明,有18株菌呈暘性,分彆含有vip3Aa、vip3Af和vip3Ba共3類vip3基因.根據已知vip3基因的全長序列設計引物,以菌株T03B001(B.thuringiensis subsp.sumiyoshiensis的總DNA為模闆擴增齣長為2.37 kb的全長基因,插入錶達載體pEB,轉化大腸桿菌(Escherichia coli) Rosetta (DE3)菌株,在低溫條件下經IPTG誘導後,錶達88 kD的蛋白,該蛋白由789箇氨基痠組成,與已知的Vip3Aa氨基痠一緻性為96％,已被國際Bt命名委員會正式命名為Vip3Aa39,GenBank登錄號為HMI17631.Vip3Aa39蛋白與本實驗室此前穫得的Vip3Aall蛋白進行比較,髮現兩者存在39箇氨基痠的差異.兩種蛋白的錶達產物採用飼餵法分彆對小地老虎(A grotis ipsilon)、小菜蛾(Plutella xylostella)、棉鈴蟲(Helicoverpa armigera)和甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)的殺蟲活性進行瞭測定,結果錶明,Vip3Aa39對小地老虎有較高的殺蟲活性,50％緻死濃度(LC50)為5.43 μg/mL,而Vip3Aa11的LC50為73.62 μg/mL; Vip3Aa39對小菜蛾具有較高的殺蟲活性,LC50為140.64 μg/mL,而Vip3Aa11對小菜蛾殺蟲活性極低；Vip3Aa11對棉鈴蟲具有較高的殺蟲活性,LC50為35.18 μg/mL,而Vip3Aa39的LC50僅為286.99 μg/mL; Vip3Aa39和Vip3Aa11均對甜菜夜蛾具有高毒力,LC50分彆為2.02和2.04 μg/mL.以上結果說明Vip3Aa39與Vip3Aa11對小地老虎、小菜蛾和棉鈴蟲的殺蟲活性顯著不同.Vip3Aa39對小地老虎和小菜蛾的毒力比Vip3Aa11高,而對棉鈴蟲的毒力明顯低于Vip3Aa11.Vip3Aa39的髮現將為重要農業害蟲的防治提供更多的選擇,為進一步研究Vip3蛋白結構和殺蟲機理提供瞭材料.
위료발굴신형vip3기인,본연구채용PCR화고분변용해곡선적방법대72주균주중vip3기인진행료감정화분석,결과표명,유18주균정양성,분별함유vip3Aa、vip3Af화vip3Ba공3류vip3기인.근거이지vip3기인적전장서렬설계인물,이균주T03B001(B.thuringiensis subsp.sumiyoshiensis적총DNA위모판확증출장위2.37 kb적전장기인,삽입표체재체pEB,전화대장간균(Escherichia coli) Rosetta (DE3)균주,재저온조건하경IPTG유도후,표체88 kD적단백,해단백유789개안기산조성,여이지적Vip3Aa안기산일치성위96％,이피국제Bt명명위원회정식명명위Vip3Aa39,GenBank등록호위HMI17631.Vip3Aa39단백여본실험실차전획득적Vip3Aall단백진행비교,발현량자존재39개안기산적차이.량충단백적표체산물채용사위법분별대소지로호(A grotis ipsilon)、소채아(Plutella xylostella)、면령충(Helicoverpa armigera)화첨채야아(Spodoptera exigua)적살충활성진행료측정,결과표명,Vip3Aa39대소지로호유교고적살충활성,50％치사농도(LC50)위5.43 μg/mL,이Vip3Aa11적LC50위73.62 μg/mL; Vip3Aa39대소채아구유교고적살충활성,LC50위140.64 μg/mL,이Vip3Aa11대소채아살충활성겁저；Vip3Aa11대면령충구유교고적살충활성,LC50위35.18 μg/mL,이Vip3Aa39적LC50부위286.99 μg/mL; Vip3Aa39화Vip3Aa11균대첨채야아구유고독력,LC50분별위2.02화2.04 μg/mL.이상결과설명Vip3Aa39여Vip3Aa11대소지로호、소채아화면령충적살충활성현저불동.Vip3Aa39대소지로호화소채아적독력비Vip3Aa11고,이대면령충적독력명현저우Vip3Aa11.Vip3Aa39적발현장위중요농업해충적방치제공경다적선택,위진일보연구Vip3단백결구화살충궤리제공료재료.
