畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2005年
6期
536-539
,共4页
吕文发%赵静%单雪松%王恒%吴伟
呂文髮%趙靜%單雪鬆%王恆%吳偉
려문발%조정%단설송%왕항%오위
抑制素%RT-PCR%克隆%原核表达
抑製素%RT-PCR%剋隆%原覈錶達
억제소%RT-PCR%극륭%원핵표체
根据GenBank中鸡卵泡抑制素α亚基序列设计引物,对该序列按大肠杆菌嗜好密码子进行优化,在设计的引物两端分别加上限制性内切酶SacⅠ和XhoⅡ的识别位点序列.利用RT-PCR技术从溆浦鹅卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素α亚基成熟区序列,经PCR扩增出354 bp片段,该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109感受态细胞,所得阳性克隆进行双酶切鉴定和PCR鉴定,并进行了测序分析,得到的克隆序列与设计的序列基本一致.表明成功地获得了抑制素α亚基编码序列的克隆载体.从阳性细菌中提取质粒,经SacⅠ和XhoⅠ酶切,回收354 bp目的片段,定向克隆到pET28a中,转化DH5α受体菌,提取质粒,再转化到BL21(DE3)中,成功筛选出阳性克隆.阳性菌经IPTG诱导,通过SDS-PAGE,检测出溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区的表达.
根據GenBank中鷄卵泡抑製素α亞基序列設計引物,對該序列按大腸桿菌嗜好密碼子進行優化,在設計的引物兩耑分彆加上限製性內切酶SacⅠ和XhoⅡ的識彆位點序列.利用RT-PCR技術從溆浦鵝卵泡的顆粒細胞總RNA中擴增齣抑製素α亞基成熟區序列,經PCR擴增齣354 bp片段,該片段與pMD18-T載體連接,轉化JM109感受態細胞,所得暘性剋隆進行雙酶切鑒定和PCR鑒定,併進行瞭測序分析,得到的剋隆序列與設計的序列基本一緻.錶明成功地穫得瞭抑製素α亞基編碼序列的剋隆載體.從暘性細菌中提取質粒,經SacⅠ和XhoⅠ酶切,迴收354 bp目的片段,定嚮剋隆到pET28a中,轉化DH5α受體菌,提取質粒,再轉化到BL21(DE3)中,成功篩選齣暘性剋隆.暘性菌經IPTG誘導,通過SDS-PAGE,檢測齣溆浦鵝卵泡抑製素α亞基編碼區的錶達.
근거GenBank중계란포억제소α아기서렬설계인물,대해서렬안대장간균기호밀마자진행우화,재설계적인물량단분별가상한제성내절매SacⅠ화XhoⅡ적식별위점서렬.이용RT-PCR기술종서포아란포적과립세포총RNA중확증출억제소α아기성숙구서렬,경PCR확증출354 bp편단,해편단여pMD18-T재체련접,전화JM109감수태세포,소득양성극륭진행쌍매절감정화PCR감정,병진행료측서분석,득도적극륭서렬여설계적서렬기본일치.표명성공지획득료억제소α아기편마서렬적극륭재체.종양성세균중제취질립,경SacⅠ화XhoⅠ매절,회수354 bp목적편단,정향극륭도pET28a중,전화DH5α수체균,제취질립,재전화도BL21(DE3)중,성공사선출양성극륭.양성균경IPTG유도,통과SDS-PAGE,검측출서포아란포억제소α아기편마구적표체.
