临床外科杂志
臨床外科雜誌
림상외과잡지
JOURNAL OF CLINICAL SURGERY
2009年
10期
662-664
,共3页
胡少勃%宋自芳%郑启昌%李伟%胡青钢%熊俊%张勇%尚丹
鬍少勃%宋自芳%鄭啟昌%李偉%鬍青鋼%熊俊%張勇%尚丹
호소발%송자방%정계창%리위%호청강%웅준%장용%상단
SM22α启动子%慢病毒%血管平滑肌细胞%聚合酶链式反应
SM22α啟動子%慢病毒%血管平滑肌細胞%聚閤酶鏈式反應
SM22α계동자%만병독%혈관평활기세포%취합매련식반응
目的 构建以SM22α启动子驱动EGFP表达的慢病毒载体,研究此载体在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中表达的效率和特异性.方法 从小鼠的基因组中采用PCR扩增SM22α启动子,将目的基因连接至T载体,并进行测序鉴定,将目的基因重组至pGC-FU载体,三质粒系统采用脂质体介导转染293T细胞进行病毒包装,体外感染VSMCs,大鼠动脉内皮细胞,人乳腺癌细胞系SK-BR-3,荧光显微镜观察EGFP的表达情况.结果 PCR扩增得到的SM22α启动子经测序证实正确;成功构建了SM22α启动子驱动EGFP的慢病毒载体LV-SM22α-EGFP,SM22α启动子能调控EGFP在VSMCs中高效表达,感染效率在95%以上,在血管内皮细胞和人乳腺癌细胞系SK-BR-3中不表达,对照慢病毒组EGFP在三种细胞中均表达,在VSMCs的感染效率在30%左右,且表达较低.结论 SM22α启动子能够特异性驱动EGFP在VSMCs中表达,LV-SM22α-EGFP能作为研究血管疾病的良好基因转移载体.
目的 構建以SM22α啟動子驅動EGFP錶達的慢病毒載體,研究此載體在血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中錶達的效率和特異性.方法 從小鼠的基因組中採用PCR擴增SM22α啟動子,將目的基因連接至T載體,併進行測序鑒定,將目的基因重組至pGC-FU載體,三質粒繫統採用脂質體介導轉染293T細胞進行病毒包裝,體外感染VSMCs,大鼠動脈內皮細胞,人乳腺癌細胞繫SK-BR-3,熒光顯微鏡觀察EGFP的錶達情況.結果 PCR擴增得到的SM22α啟動子經測序證實正確;成功構建瞭SM22α啟動子驅動EGFP的慢病毒載體LV-SM22α-EGFP,SM22α啟動子能調控EGFP在VSMCs中高效錶達,感染效率在95%以上,在血管內皮細胞和人乳腺癌細胞繫SK-BR-3中不錶達,對照慢病毒組EGFP在三種細胞中均錶達,在VSMCs的感染效率在30%左右,且錶達較低.結論 SM22α啟動子能夠特異性驅動EGFP在VSMCs中錶達,LV-SM22α-EGFP能作為研究血管疾病的良好基因轉移載體.
목적 구건이SM22α계동자구동EGFP표체적만병독재체,연구차재체재혈관평활기세포(vascular smooth muscle cells,VSMCs)중표체적효솔화특이성.방법 종소서적기인조중채용PCR확증SM22α계동자,장목적기인련접지T재체,병진행측서감정,장목적기인중조지pGC-FU재체,삼질립계통채용지질체개도전염293T세포진행병독포장,체외감염VSMCs,대서동맥내피세포,인유선암세포계SK-BR-3,형광현미경관찰EGFP적표체정황.결과 PCR확증득도적SM22α계동자경측서증실정학;성공구건료SM22α계동자구동EGFP적만병독재체LV-SM22α-EGFP,SM22α계동자능조공EGFP재VSMCs중고효표체,감염효솔재95%이상,재혈관내피세포화인유선암세포계SK-BR-3중불표체,대조만병독조EGFP재삼충세포중균표체,재VSMCs적감염효솔재30%좌우,차표체교저.결론 SM22α계동자능구특이성구동EGFP재VSMCs중표체,LV-SM22α-EGFP능작위연구혈관질병적량호기인전이재체.
