重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2011年
22期
2208-2210,封4
,共4页
张磊%张柳%高建清%田发明%韩大成%牛军强%刘晓宁
張磊%張柳%高建清%田髮明%韓大成%牛軍彊%劉曉寧
장뢰%장류%고건청%전발명%한대성%우군강%류효저
成骨细胞%RNA干扰%干细胞%Wnt信号转导途径
成骨細胞%RNA榦擾%榦細胞%Wnt信號轉導途徑
성골세포%RNA간우%간세포%Wnt신호전도도경
目的 通过对大鼠Axin2基因的RNA干扰(RNAi),探讨Axin2对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化过程的影响.方法 取6周龄雌性SD大鼠双侧股、胫骨骨髓细胞,采用全骨髓培养法进行原代和传代培养.细胞传2代后实验组进行Axin2 mRNA干扰质粒转染,对照组进行阴性干扰质粒转染.转染48 h后换用成骨诱导分化培养基.诱导分化28 d后用 von Kossa方法进行细胞外基质矿化染色.采用适时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)技术检测诱导分化后第7、14天β-catenin、骨钙素(OCN)、frizzled-2、Lef-1、Wnt5a mRNA的表达水平.结果 对照组大鼠BMSCs经体外诱导后分化为具备矿化细胞外基质能力的成熟成骨细胞,而实验组BMSCs成骨分化不全;RQ-PCR检测显示,诱导分化后第7天实验组β-catenin、frizzled-2 mRNA表达水平显著低于对照组,而OCN、Lef-1、Wnt5a mRNA表达水平显著高于对照组;诱导分化后第14天实验组frizzled-2、Lef-1和Wnt5a mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05).结论 对大鼠BMSCs Axin2进行RNAi后,BMSCs向成骨细胞分化晚期细胞外基质矿化能力减弱.
目的 通過對大鼠Axin2基因的RNA榦擾(RNAi),探討Axin2對大鼠骨髓基質榦細胞(BMSCs)嚮成骨細胞分化過程的影響.方法 取6週齡雌性SD大鼠雙側股、脛骨骨髓細胞,採用全骨髓培養法進行原代和傳代培養.細胞傳2代後實驗組進行Axin2 mRNA榦擾質粒轉染,對照組進行陰性榦擾質粒轉染.轉染48 h後換用成骨誘導分化培養基.誘導分化28 d後用 von Kossa方法進行細胞外基質礦化染色.採用適時定量聚閤酶鏈反應(RQ-PCR)技術檢測誘導分化後第7、14天β-catenin、骨鈣素(OCN)、frizzled-2、Lef-1、Wnt5a mRNA的錶達水平.結果 對照組大鼠BMSCs經體外誘導後分化為具備礦化細胞外基質能力的成熟成骨細胞,而實驗組BMSCs成骨分化不全;RQ-PCR檢測顯示,誘導分化後第7天實驗組β-catenin、frizzled-2 mRNA錶達水平顯著低于對照組,而OCN、Lef-1、Wnt5a mRNA錶達水平顯著高于對照組;誘導分化後第14天實驗組frizzled-2、Lef-1和Wnt5a mRNA錶達水平均顯著高于對照組(P<0.05).結論 對大鼠BMSCs Axin2進行RNAi後,BMSCs嚮成骨細胞分化晚期細胞外基質礦化能力減弱.
목적 통과대대서Axin2기인적RNA간우(RNAi),탐토Axin2대대서골수기질간세포(BMSCs)향성골세포분화과정적영향.방법 취6주령자성SD대서쌍측고、경골골수세포,채용전골수배양법진행원대화전대배양.세포전2대후실험조진행Axin2 mRNA간우질립전염,대조조진행음성간우질립전염.전염48 h후환용성골유도분화배양기.유도분화28 d후용 von Kossa방법진행세포외기질광화염색.채용괄시정량취합매련반응(RQ-PCR)기술검측유도분화후제7、14천β-catenin、골개소(OCN)、frizzled-2、Lef-1、Wnt5a mRNA적표체수평.결과 대조조대서BMSCs경체외유도후분화위구비광화세포외기질능력적성숙성골세포,이실험조BMSCs성골분화불전;RQ-PCR검측현시,유도분화후제7천실험조β-catenin、frizzled-2 mRNA표체수평현저저우대조조,이OCN、Lef-1、Wnt5a mRNA표체수평현저고우대조조;유도분화후제14천실험조frizzled-2、Lef-1화Wnt5a mRNA표체수평균현저고우대조조(P<0.05).결론 대대서BMSCs Axin2진행RNAi후,BMSCs향성골세포분화만기세포외기질광화능력감약.
