CAJ | 학술논문

目的:研究蛋白激酶C受体1(receptor for activated C kinase 1,RACK1)基因沉默或过表达对大细胞肺癌细胞系H460及肺腺癌细胞系A549细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用脂质体转染法分别将针对RACK1基因的RACK1 siRNA和重组质粒pCMV-sport6-RACK1转入H460和A549细胞中.采用MTT法和集落形成实验分析RACK1基因对细胞增殖的影响,FCM检测其对细胞周期的影响；采用酵母双杂交法、免疫共沉淀法、激光共聚焦显微术及磷酸化蛋白免疫共沉淀法检测RACK1表达与肺癌细胞增殖之间的关系.结果:转染RACK1 siRNA后,H460和A549细胞中RACK1蛋白的表达量明显下调,细胞的增殖能力和集落生成数明显降低,S期细胞所占比例明显下降(P＜0.01)；转染pCMV-sport6-RACK1后,H460和A549细胞中RACK1蛋白的表达量明显上调,细胞的增殖能力增强,倍增时间增加,集落生成数明显增多,S期细胞所占比例明显升高(P＜0.01).采用酵母双杂交法和免疫共沉淀法检测发现,RACK1与MCM7存在直接作用.RACK1进入细胞核内,与微小染色体维持蛋白7 (minichromosome maintenance protein 7,MCM7)特异性结合,促进MCM7蛋白磷酸化.结论:RACK1通过直接与MCM7结合促进MCM7蛋白磷酸化途径,继而促进肺癌细胞增殖.
목적:연구단백격매C수체1(receptor for activated C kinase 1,RACK1)기인침묵혹과표체대대세포폐암세포계H460급폐선암세포계A549세포증식적영향,병탐토기가능적작용궤제.방법:채용지질체전염법분별장침대RACK1기인적RACK1 siRNA화중조질립pCMV-sport6-RACK1전입H460화A549세포중.채용MTT법화집락형성실험분석RACK1기인대세포증식적영향,FCM검측기대세포주기적영향；채용효모쌍잡교법、면역공침정법、격광공취초현미술급린산화단백면역공침정법검측RACK1표체여폐암세포증식지간적관계.결과:전염RACK1 siRNA후,H460화A549세포중RACK1단백적표체량명현하조,세포적증식능력화집락생성수명현강저,S기세포소점비례명현하강(P＜0.01)；전염pCMV-sport6-RACK1후,H460화A549세포중RACK1단백적표체량명현상조,세포적증식능력증강,배증시간증가,집락생성수명현증다,S기세포소점비례명현승고(P＜0.01).채용효모쌍잡교법화면역공침정법검측발현,RACK1여MCM7존재직접작용.RACK1진입세포핵내,여미소염색체유지단백7 (minichromosome maintenance protein 7,MCM7)특이성결합,촉진MCM7단백린산화.결론:RACK1통과직접여MCM7결합촉진MCM7단백린산화도경,계이촉진폐암세포증식.