旋毛虫肌幼虫p43cDNA的克隆及鉴定
선모충기유충p43cDNA적극륭급감정
Cloning and Characterization of p43 cDNA from Trichinella spiralis
  • 万方数据
    中国寄生虫学与寄生虫病杂志 중국기생충학여기생충병잡지
    CHINESE JOURNAL OF PARASITOLOGY AND PARASITIC DISEASES
    2005年 6期 432-436,440 ,共6页

    郭恒%李莲瑞%刘明远%吴秀萍%孙树民%付宝权%高长玲%卢强%陈启军%P.Boireau

    곽항%리련서%류명원%오수평%손수민%부보권%고장령%로강%진계군%P.Boireau

    旋毛虫%p43cDNA%克隆%表达%脱氧核糖核酸酶Ⅱ 鏇毛蟲%p43cDNA%剋隆%錶達%脫氧覈糖覈痠酶Ⅱ
    선모충%p43cDNA%극륭%표체%탈양핵당핵산매Ⅱ
    目的克隆旋毛虫肌幼虫p43cDNA并对其表达的融合蛋白酶活性进行鉴定与分析.方法用PCR技术从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因,克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希菌NovaBlue,序列测定后克隆到原核表达载体pET28a并转入表达菌DE3中.经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后提取包涵体并复性,通过降解双链λDNA测定其融合蛋白脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNase Ⅱ)活性.结果成功克隆到p43 cDNA序列,该cDNA序列与美国发表的存在两个核苷酸的变异,分别为第210位的C变为T,第604位的A变为G.基于3名研究者从旋毛虫T.spiralis美国分离株获得的序列相同、6名国内研究者(含本课题组)从T.spiralis中周分离株获得的序列也相同,由此可以确定这两个核苷酸的变异为T.spiralis中国分离株特异性和特征性单核苷酸多态性(SNP)标记.p43重组蛋白能够降解双链λDNA,表明其有DNase Ⅱ酶活性.结论成功克隆到p43cDNA,T.spiralis中国分离株的p43cDNA具有两个SNP标记,其表达的重组蛋白具有DNase Ⅱ酶活性.
    목적극륭선모충기유충p43cDNA병대기표체적융합단백매활성진행감정여분석.방법용PCR기술종선모충기유충cDNA문고중확증파기인,극륭도pMD-18T재체,전화지대장애희균NovaBlue,서렬측정후극륭도원핵표체재체pET28a병전입표체균DE3중.경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체후제취포함체병복성,통과강해쌍련λDNA측정기융합단백탈양핵당핵산매Ⅱ(DNase Ⅱ)활성.결과성공극륭도p43 cDNA서렬,해cDNA서렬여미국발표적존재량개핵감산적변이,분별위제210위적C변위T,제604위적A변위G.기우3명연구자종선모충T.spiralis미국분리주획득적서렬상동、6명국내연구자(함본과제조)종T.spiralis중주분리주획득적서렬야상동,유차가이학정저량개핵감산적변이위T.spiralis중국분리주특이성화특정성단핵감산다태성(SNP)표기.p43중조단백능구강해쌍련λDNA,표명기유DNase Ⅱ매활성.결론성공극륭도p43cDNA,T.spiralis중국분리주적p43cDNA구유량개SNP표기,기표체적중조단백구유DNase Ⅱ매활성.
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