中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2006年
12期
1139-1142
,共4页
甘燕%吴少庭%秦莉%潘晖榕%戴五星%袁仕善%黄达娜
甘燕%吳少庭%秦莉%潘暉榕%戴五星%袁仕善%黃達娜
감연%오소정%진리%반휘용%대오성%원사선%황체나
SARS冠状病毒%小囊膜蛋白%DNA疫苗
SARS冠狀病毒%小囊膜蛋白%DNA疫苗
SARS관상병독%소낭막단백%DNA역묘
目的 构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)小囊膜蛋白(E蛋白)的DNA疫苗pVAC-E,观察其在小鼠中诱导的免疫应答.方法 采用PCR方法体外扩增SARS冠状病毒E蛋白的基因片段,克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-E重组质粒.通过脂质体介导瞬时转染非洲绿猴肾(Vero)细胞,Western-blot鉴定E蛋白在细胞中的表达.以基因枪方式免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体,MTT法测定淋巴细胞转化率,流式细胞仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布.结果 成功构建SARS-CoV DNA疫苗pVAC-E.Western-blot结果示,转染后的Vero细胞可表达一约9kD大小能被SARS病人血清特异识别的蛋白条带.免疫小鼠中未检测到明显的抗体滴度升高.淋巴细胞转化率在免疫组和对照组间无差别(P＞0.05).脾脏T淋巴细胞亚群分析示免疫组小鼠CD4+细胞显著升高(P＜0.05),CD48+细胞与对照组相比无显著差异.结论 构建的真核表达质粒pVAC-E能在Vero细胞中表达,表达产物具免疫活性,免疫小鼠后能诱导一定的细胞免疫应答.
目的 構建SARS冠狀病毒(SARS-CoV)小囊膜蛋白(E蛋白)的DNA疫苗pVAC-E,觀察其在小鼠中誘導的免疫應答.方法 採用PCR方法體外擴增SARS冠狀病毒E蛋白的基因片段,剋隆入真覈錶達載體pVAC,構建pVAC-E重組質粒.通過脂質體介導瞬時轉染非洲綠猴腎(Vero)細胞,Western-blot鑒定E蛋白在細胞中的錶達.以基因鎗方式免疫小鼠,ELISA檢測小鼠血清特異性抗體,MTT法測定淋巴細胞轉化率,流式細胞儀檢測小鼠脾髒T淋巴細胞亞群分佈.結果 成功構建SARS-CoV DNA疫苗pVAC-E.Western-blot結果示,轉染後的Vero細胞可錶達一約9kD大小能被SARS病人血清特異識彆的蛋白條帶.免疫小鼠中未檢測到明顯的抗體滴度升高.淋巴細胞轉化率在免疫組和對照組間無差彆(P＞0.05).脾髒T淋巴細胞亞群分析示免疫組小鼠CD4+細胞顯著升高(P＜0.05),CD48+細胞與對照組相比無顯著差異.結論 構建的真覈錶達質粒pVAC-E能在Vero細胞中錶達,錶達產物具免疫活性,免疫小鼠後能誘導一定的細胞免疫應答.
목적 구건SARS관상병독(SARS-CoV)소낭막단백(E단백)적DNA역묘pVAC-E,관찰기재소서중유도적면역응답.방법 채용PCR방법체외확증SARS관상병독E단백적기인편단,극륭입진핵표체재체pVAC,구건pVAC-E중조질립.통과지질체개도순시전염비주록후신(Vero)세포,Western-blot감정E단백재세포중적표체.이기인창방식면역소서,ELISA검측소서혈청특이성항체,MTT법측정림파세포전화솔,류식세포의검측소서비장T림파세포아군분포.결과 성공구건SARS-CoV DNA역묘pVAC-E.Western-blot결과시,전염후적Vero세포가표체일약9kD대소능피SARS병인혈청특이식별적단백조대.면역소서중미검측도명현적항체적도승고.림파세포전화솔재면역조화대조조간무차별(P＞0.05).비장T림파세포아군분석시면역조소서CD4+세포현저승고(P＜0.05),CD48+세포여대조조상비무현저차이.결론 구건적진핵표체질립pVAC-E능재Vero세포중표체,표체산물구면역활성,면역소서후능유도일정적세포면역응답.
