临床肝胆病杂志
臨床肝膽病雜誌
림상간담병잡지
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL HEPATOLOGY
2011年
1期
40-44
,共5页
周云%李端%陈琳%赵甫涛%马力%汪鸿%潘蕾%贾战生
週雲%李耑%陳琳%趙甫濤%馬力%汪鴻%潘蕾%賈戰生
주운%리단%진림%조보도%마력%왕홍%반뢰%가전생
肝炎病毒属%表位%树突细胞%病毒性肝炎疫苗%T淋巴细胞,细胞毒性
肝炎病毒屬%錶位%樹突細胞%病毒性肝炎疫苗%T淋巴細胞,細胞毒性
간염병독속%표위%수돌세포%병독성간염역묘%T림파세포,세포독성
目的 构建丙型肝炎病毒(HCV)多细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位树突状细胞(DC)疫苗,观察其体外刺激的T细胞反应,为下一步做体内免疫实验提供一定的资料.方法 构建和制备出含绿色荧光蛋白(GFP)标签的HCV两个CTL表位的重组腺病毒,感染DC,直接在荧光显微镜下或用流式细胞仪检测其感染率;RT-PCR和Western Blot方法检测HCV多CTL表位的表达.流式细胞术分析感染前后DC的CD80、CD83、CD86和人类白细胞抗原(HLA)-DR的表达,CCK-8法观察感染重组腺病毒的DC促进T细胞的增殖效应.ELISA检测重组腺病毒刺激后的DC培养上清液内白细胞介素(IL)-12及DC和T细胞混合培养上清液内干扰素(IFN)-γ的含量.用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL的杀伤活性.结果 成功构建含GFP标签的HCV多CTL表位的重组腺病毒,并在DC中表达.重组腺病毒能促进DC成熟,DC的CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达分别为(71.19±3.29)%、(81.21±5.07)%、(91.23±4.24)%、(97.95±5.31)%.感染DC后促进同源T细胞增殖,DC:T为1:10时增殖指数为6.806±0.247.分泌的IL-12和IFN-γ也明显增多,分别达到(193.83±6.25)pg/ml和(111.14±2.09)pg/ml.感染DC刺激的CTL能特异性杀伤转染FL-J6/JFH的Huh-7.5细胞,当效靶比为100:1时,ADI-DC-L的杀伤率为35.99%.结论 重组多CTL表位腺病毒在体外能有效感染DC,促进了T细胞反应,为下一步抗HCV的DC疫苗研制打下基础.
目的 構建丙型肝炎病毒(HCV)多細胞毒性T淋巴細胞(CTL)錶位樹突狀細胞(DC)疫苗,觀察其體外刺激的T細胞反應,為下一步做體內免疫實驗提供一定的資料.方法 構建和製備齣含綠色熒光蛋白(GFP)標籤的HCV兩箇CTL錶位的重組腺病毒,感染DC,直接在熒光顯微鏡下或用流式細胞儀檢測其感染率;RT-PCR和Western Blot方法檢測HCV多CTL錶位的錶達.流式細胞術分析感染前後DC的CD80、CD83、CD86和人類白細胞抗原(HLA)-DR的錶達,CCK-8法觀察感染重組腺病毒的DC促進T細胞的增殖效應.ELISA檢測重組腺病毒刺激後的DC培養上清液內白細胞介素(IL)-12及DC和T細胞混閤培養上清液內榦擾素(IFN)-γ的含量.用乳痠脫氫酶(LDH)釋放法檢測特異性CTL的殺傷活性.結果 成功構建含GFP標籤的HCV多CTL錶位的重組腺病毒,併在DC中錶達.重組腺病毒能促進DC成熟,DC的CD80、CD83、CD86和HLA-DR的錶達分彆為(71.19±3.29)%、(81.21±5.07)%、(91.23±4.24)%、(97.95±5.31)%.感染DC後促進同源T細胞增殖,DC:T為1:10時增殖指數為6.806±0.247.分泌的IL-12和IFN-γ也明顯增多,分彆達到(193.83±6.25)pg/ml和(111.14±2.09)pg/ml.感染DC刺激的CTL能特異性殺傷轉染FL-J6/JFH的Huh-7.5細胞,噹效靶比為100:1時,ADI-DC-L的殺傷率為35.99%.結論 重組多CTL錶位腺病毒在體外能有效感染DC,促進瞭T細胞反應,為下一步抗HCV的DC疫苗研製打下基礎.
목적 구건병형간염병독(HCV)다세포독성T림파세포(CTL)표위수돌상세포(DC)역묘,관찰기체외자격적T세포반응,위하일보주체내면역실험제공일정적자료.방법 구건화제비출함록색형광단백(GFP)표첨적HCV량개CTL표위적중조선병독,감염DC,직접재형광현미경하혹용류식세포의검측기감염솔;RT-PCR화Western Blot방법검측HCV다CTL표위적표체.류식세포술분석감염전후DC적CD80、CD83、CD86화인류백세포항원(HLA)-DR적표체,CCK-8법관찰감염중조선병독적DC촉진T세포적증식효응.ELISA검측중조선병독자격후적DC배양상청액내백세포개소(IL)-12급DC화T세포혼합배양상청액내간우소(IFN)-γ적함량.용유산탈경매(LDH)석방법검측특이성CTL적살상활성.결과 성공구건함GFP표첨적HCV다CTL표위적중조선병독,병재DC중표체.중조선병독능촉진DC성숙,DC적CD80、CD83、CD86화HLA-DR적표체분별위(71.19±3.29)%、(81.21±5.07)%、(91.23±4.24)%、(97.95±5.31)%.감염DC후촉진동원T세포증식,DC:T위1:10시증식지수위6.806±0.247.분비적IL-12화IFN-γ야명현증다,분별체도(193.83±6.25)pg/ml화(111.14±2.09)pg/ml.감염DC자격적CTL능특이성살상전염FL-J6/JFH적Huh-7.5세포,당효파비위100:1시,ADI-DC-L적살상솔위35.99%.결론 중조다CTL표위선병독재체외능유효감염DC,촉진료T세포반응,위하일보항HCV적DC역묘연제타하기출.
