医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2011年
4期
334-339
,共6页
钱凤英%兰风华%董荔红%黄俏佳
錢鳳英%蘭風華%董荔紅%黃俏佳
전봉영%란풍화%동려홍%황초가
腺病毒载体%小干扰RNA%MEKK3基因
腺病毒載體%小榦擾RNA%MEKK3基因
선병독재체%소간우RNA%MEKK3기인
目的 构建人MEKK3基因的小干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体表达载体,观察其在胃腺癌AGS细胞中对MEKK3的表达抑制.方法 设计并合成针对人MEKK3基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,得到的质粒用PmeⅠ线性化后在大肠埃项菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组.卡那霉素筛选后,用PacⅠ酶切鉴定.鉴定正确的质粒经PacⅠ酶切、乙醇沉淀后转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEKK3-siRNA重组腺病毒.病毒体外转导人胃腺癌AGS细胞,Western印迹法检测其对MEKK3蛋白表达的抑制.结果酶切和测序鉴定表明3个MEKK3 siRNA重组腺病毒表达载体正确无误.Western印迹检测结果显示3个pAd-MEKK3-siRNA重组腺病毒表达载体中有两个可有效地抑制胃腺癌AGS细胞中MEKK3基因的表达,其中以pAd-MEKK3-siRNA3的抑制作用最显著,有效率达89 %.结论 成功构建了针对MEKK3基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究MEKK3基因在人胃腺癌AGS细胞中的作用和功能奠定了基础.
目的 構建人MEKK3基因的小榦擾RNA(siRNA)重組腺病毒載體錶達載體,觀察其在胃腺癌AGS細胞中對MEKK3的錶達抑製.方法 設計併閤成針對人MEKK3基因3箇不同部位siRNA靶點的模闆DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ剋隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭載體中,得到的質粒用PmeⅠ線性化後在大腸埃項菌BJ5183中與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1進行同源重組.卡那黴素篩選後,用PacⅠ酶切鑒定.鑒定正確的質粒經PacⅠ酶切、乙醇沉澱後轉染293A細胞,包裝得到具有感染能力的pAd-MEKK3-siRNA重組腺病毒.病毒體外轉導人胃腺癌AGS細胞,Western印跡法檢測其對MEKK3蛋白錶達的抑製.結果酶切和測序鑒定錶明3箇MEKK3 siRNA重組腺病毒錶達載體正確無誤.Western印跡檢測結果顯示3箇pAd-MEKK3-siRNA重組腺病毒錶達載體中有兩箇可有效地抑製胃腺癌AGS細胞中MEKK3基因的錶達,其中以pAd-MEKK3-siRNA3的抑製作用最顯著,有效率達89 %.結論 成功構建瞭針對MEKK3基因的siRNA重組腺病毒載體,為進一步研究MEKK3基因在人胃腺癌AGS細胞中的作用和功能奠定瞭基礎.
목적 구건인MEKK3기인적소간우RNA(siRNA)중조선병독재체표체재체,관찰기재위선암AGS세포중대MEKK3적표체억제.방법 설계병합성침대인MEKK3기인3개불동부위siRNA파점적모판DNA서렬,이MluⅠ급XhoⅠ극륭입pRNAT-H1.1/Adeno천사재체중,득도적질립용PmeⅠ선성화후재대장애항균BJ5183중여선병독골가질립pAdEasy-1진행동원중조.잡나매소사선후,용PacⅠ매절감정.감정정학적질립경PacⅠ매절、을순침정후전염293A세포,포장득도구유감염능력적pAd-MEKK3-siRNA중조선병독.병독체외전도인위선암AGS세포,Western인적법검측기대MEKK3단백표체적억제.결과매절화측서감정표명3개MEKK3 siRNA중조선병독표체재체정학무오.Western인적검측결과현시3개pAd-MEKK3-siRNA중조선병독표체재체중유량개가유효지억제위선암AGS세포중MEKK3기인적표체,기중이pAd-MEKK3-siRNA3적억제작용최현저,유효솔체89 %.결론 성공구건료침대MEKK3기인적siRNA중조선병독재체,위진일보연구MEKK3기인재인위선암AGS세포중적작용화공능전정료기출.