浙江大学学报(农业与生命科学版)
浙江大學學報(農業與生命科學版)
절강대학학보(농업여생명과학판)
2011年
4期
380-386
,共7页
刘菲%唐卫杰%程安春%汪铭书%赵婷婷%高丽芹
劉菲%唐衛傑%程安春%汪銘書%趙婷婷%高麗芹
류비%당위걸%정안춘%왕명서%조정정%고려근
鹅α干扰素%COS-7细胞%免疫印迹%间接免疫荧光%细胞病变抑制法
鵝α榦擾素%COS-7細胞%免疫印跡%間接免疫熒光%細胞病變抑製法
아α간우소%COS-7세포%면역인적%간접면역형광%세포병변억제법
为了研究鹅α干扰素( goIFN-α)基因的特性和功能,将天府肉鹅的α干扰素基因克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建重组质粒pcDNA3.1-goIFN-α,脂质体介导将其转入COS-7细胞中；应用间接免疫荧光、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫印迹(Western-blot)法检测goIFN-α基因在COS-7细胞中的转录和表达情况,并对COS-7细胞表达上清液进行抗病毒活性检测.结果表明:目的蛋白在转染12 h后就可以被检测出,36 h前目的蛋白在上清液中快速增加,之后增加速度变慢；重组质粒能够在COS-7细胞内得到高效表达,表达的蛋白分子质量为38ku,比预测的分子质量(约21 ku)大；间接免疫荧光显示,细胞内出现黄绿色荧光,胞核附近最亮；表达产物经细胞病变抑制法测定,显示出具有明显的抗猪水泡性口炎病毒(VSV)及小鹅瘟病毒(GPV)的活性.
為瞭研究鵝α榦擾素( goIFN-α)基因的特性和功能,將天府肉鵝的α榦擾素基因剋隆到pcDNA3.1(+)真覈錶達載體上,構建重組質粒pcDNA3.1-goIFN-α,脂質體介導將其轉入COS-7細胞中；應用間接免疫熒光、酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和免疫印跡(Western-blot)法檢測goIFN-α基因在COS-7細胞中的轉錄和錶達情況,併對COS-7細胞錶達上清液進行抗病毒活性檢測.結果錶明:目的蛋白在轉染12 h後就可以被檢測齣,36 h前目的蛋白在上清液中快速增加,之後增加速度變慢；重組質粒能夠在COS-7細胞內得到高效錶達,錶達的蛋白分子質量為38ku,比預測的分子質量(約21 ku)大；間接免疫熒光顯示,細胞內齣現黃綠色熒光,胞覈附近最亮；錶達產物經細胞病變抑製法測定,顯示齣具有明顯的抗豬水泡性口炎病毒(VSV)及小鵝瘟病毒(GPV)的活性.
위료연구아α간우소( goIFN-α)기인적특성화공능,장천부육아적α간우소기인극륭도pcDNA3.1(+)진핵표체재체상,구건중조질립pcDNA3.1-goIFN-α,지질체개도장기전입COS-7세포중；응용간접면역형광、매련면역흡부측정(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)화면역인적(Western-blot)법검측goIFN-α기인재COS-7세포중적전록화표체정황,병대COS-7세포표체상청액진행항병독활성검측.결과표명:목적단백재전염12 h후취가이피검측출,36 h전목적단백재상청액중쾌속증가,지후증가속도변만；중조질립능구재COS-7세포내득도고효표체,표체적단백분자질량위38ku,비예측적분자질량(약21 ku)대；간접면역형광현시,세포내출현황록색형광,포핵부근최량；표체산물경세포병변억제법측정,현시출구유명현적항저수포성구염병독(VSV)급소아온병독(GPV)적활성.
