中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2011年
12期
920-923
,共4页
陈振师%刘立科%汪恩强%李业南%华荣虹
陳振師%劉立科%汪恩彊%李業南%華榮虹
진진사%류립과%왕은강%리업남%화영홍
乙型脑炎病毒%NS1蛋白%细胞系
乙型腦炎病毒%NS1蛋白%細胞繫
을형뇌염병독%NS1단백%세포계
为建立稳定表达乙型脑炎病毒(JEV) NS1蛋白的真核细胞系,本研究将编码JEV NS1蛋白的人工合成基因克隆到真核表达载体pCAGG-TK-neo中,构建了重组质粒pCAGG-opti-NS1.重组质粒经脂质体转染RK-13细胞,以含G418的选择性培养基选择培养,经细胞克隆纯化,以间接免疫荧光试验(IEA)筛选表达目的基因的细胞.结果表明,转染的RK-13细胞经G418加压及IFA筛选后,获得表达JEV NS1蛋白的阳性RK-13细胞系.经RT-PCR、western blot和IFA鉴定,该细胞系在传代至第15代后仍然可以稳定表达NS1蛋白.本实验获得了能够稳定表达JEV NS1蛋白的细胞系,为进一步开展JEV相关的研究奠定了基础.
為建立穩定錶達乙型腦炎病毒(JEV) NS1蛋白的真覈細胞繫,本研究將編碼JEV NS1蛋白的人工閤成基因剋隆到真覈錶達載體pCAGG-TK-neo中,構建瞭重組質粒pCAGG-opti-NS1.重組質粒經脂質體轉染RK-13細胞,以含G418的選擇性培養基選擇培養,經細胞剋隆純化,以間接免疫熒光試驗(IEA)篩選錶達目的基因的細胞.結果錶明,轉染的RK-13細胞經G418加壓及IFA篩選後,穫得錶達JEV NS1蛋白的暘性RK-13細胞繫.經RT-PCR、western blot和IFA鑒定,該細胞繫在傳代至第15代後仍然可以穩定錶達NS1蛋白.本實驗穫得瞭能夠穩定錶達JEV NS1蛋白的細胞繫,為進一步開展JEV相關的研究奠定瞭基礎.
위건립은정표체을형뇌염병독(JEV) NS1단백적진핵세포계,본연구장편마JEV NS1단백적인공합성기인극륭도진핵표체재체pCAGG-TK-neo중,구건료중조질립pCAGG-opti-NS1.중조질립경지질체전염RK-13세포,이함G418적선택성배양기선택배양,경세포극륭순화,이간접면역형광시험(IEA)사선표체목적기인적세포.결과표명,전염적RK-13세포경G418가압급IFA사선후,획득표체JEV NS1단백적양성RK-13세포계.경RT-PCR、western blot화IFA감정,해세포계재전대지제15대후잉연가이은정표체NS1단백.본실험획득료능구은정표체JEV NS1단백적세포계,위진일보개전JEV상관적연구전정료기출.
