遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2005年
5期
792-796
,共5页
孙艳菊%周忠卫%姚建秀%孙体昌%许琰艳%文雅%鲍时来
孫豔菊%週忠衛%姚建秀%孫體昌%許琰豔%文雅%鮑時來
손염국%주충위%요건수%손체창%허염염%문아%포시래
钩端螺旋体甲基化转移酶%钩端螺旋体%基因表达%纯化%大肠杆菌
鉤耑螺鏇體甲基化轉移酶%鉤耑螺鏇體%基因錶達%純化%大腸桿菌
구단라선체갑기화전이매%구단라선체%기인표체%순화%대장간균
以钩端螺旋体基因组DNA为模板,通过酶联聚合反应(PCR)得到钩端螺旋体中prmA的同源基因liprmA的全基因编码序列,并克隆到原核表达载体pET22b中.通过优化大肠杆菌培养和诱导条件,含目的蛋白的融合蛋白可溶表达量达到40 mg/L,约占菌体总蛋白的40%.经Ni-NTA His Bind亲和柱纯化,得到纯度大于95%的目的蛋白.氨基酸序列同源性分析显示liPrmA与原核生物和真核生物的核糖体蛋白L11甲基化转移酶的功能域一级结构高度一致;活性分析显示,纯化的liPrmA有钩端螺旋体核糖体蛋白L11甲基化转移酶的活性.
以鉤耑螺鏇體基因組DNA為模闆,通過酶聯聚閤反應(PCR)得到鉤耑螺鏇體中prmA的同源基因liprmA的全基因編碼序列,併剋隆到原覈錶達載體pET22b中.通過優化大腸桿菌培養和誘導條件,含目的蛋白的融閤蛋白可溶錶達量達到40 mg/L,約佔菌體總蛋白的40%.經Ni-NTA His Bind親和柱純化,得到純度大于95%的目的蛋白.氨基痠序列同源性分析顯示liPrmA與原覈生物和真覈生物的覈糖體蛋白L11甲基化轉移酶的功能域一級結構高度一緻;活性分析顯示,純化的liPrmA有鉤耑螺鏇體覈糖體蛋白L11甲基化轉移酶的活性.
이구단라선체기인조DNA위모판,통과매련취합반응(PCR)득도구단라선체중prmA적동원기인liprmA적전기인편마서렬,병극륭도원핵표체재체pET22b중.통과우화대장간균배양화유도조건,함목적단백적융합단백가용표체량체도40 mg/L,약점균체총단백적40%.경Ni-NTA His Bind친화주순화,득도순도대우95%적목적단백.안기산서렬동원성분석현시liPrmA여원핵생물화진핵생물적핵당체단백L11갑기화전이매적공능역일급결구고도일치;활성분석현시,순화적liPrmA유구단라선체핵당체단백L11갑기화전이매적활성.
