中国药科大学学报
中國藥科大學學報
중국약과대학학보
JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY
2006年
4期
367-370
,共4页
脱氢奎尼酸合成酶%奎尼酸脱氢酶%奎尼酸%生物合成
脫氫奎尼痠閤成酶%奎尼痠脫氫酶%奎尼痠%生物閤成
탈경규니산합성매%규니산탈경매%규니산%생물합성
目的:构建共表达载体pETDuet-aroB-qutB,在大肠杆菌中同时表达奎尼酸合成途径中的关键酶脱氢奎尼酸合成酶(DHQase)和奎尼酸脱氢酶(QDHase).方法:分别以大肠杆菌(B21)和构巢曲霉(ATCC 24919)基因组为模板,采用PCR法扩增得到脱氢奎尼酸合成酶基因aroB和奎尼酸脱氢酶基因qutB,克隆接入pETDuet-1载体中,转化入大肠杆菌BL21,在宿主菌中共表达脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶.结果:获得了包含pETDuet-aroB-qutB共表达载体的重组大肠杆菌.IPTG(0.5 mmol/L)诱导重组菌4 h后,脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶表达量分别占菌体总蛋白的18.7%和30.5%,酶活力为70.4 U/L、40.2 U/L,分别提高了14.1倍和22.3倍.结论:实现了脱氢奎尼酸合成酶和奎尼酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的高效共表达,为基因工程法生物合成奎尼酸奠定了基础.
目的:構建共錶達載體pETDuet-aroB-qutB,在大腸桿菌中同時錶達奎尼痠閤成途徑中的關鍵酶脫氫奎尼痠閤成酶(DHQase)和奎尼痠脫氫酶(QDHase).方法:分彆以大腸桿菌(B21)和構巢麯黴(ATCC 24919)基因組為模闆,採用PCR法擴增得到脫氫奎尼痠閤成酶基因aroB和奎尼痠脫氫酶基因qutB,剋隆接入pETDuet-1載體中,轉化入大腸桿菌BL21,在宿主菌中共錶達脫氫奎尼痠閤成酶和奎尼痠脫氫酶.結果:穫得瞭包含pETDuet-aroB-qutB共錶達載體的重組大腸桿菌.IPTG(0.5 mmol/L)誘導重組菌4 h後,脫氫奎尼痠閤成酶和奎尼痠脫氫酶錶達量分彆佔菌體總蛋白的18.7%和30.5%,酶活力為70.4 U/L、40.2 U/L,分彆提高瞭14.1倍和22.3倍.結論:實現瞭脫氫奎尼痠閤成酶和奎尼痠脫氫酶基因在大腸桿菌中的高效共錶達,為基因工程法生物閤成奎尼痠奠定瞭基礎.
목적:구건공표체재체pETDuet-aroB-qutB,재대장간균중동시표체규니산합성도경중적관건매탈경규니산합성매(DHQase)화규니산탈경매(QDHase).방법:분별이대장간균(B21)화구소곡매(ATCC 24919)기인조위모판,채용PCR법확증득도탈경규니산합성매기인aroB화규니산탈경매기인qutB,극륭접입pETDuet-1재체중,전화입대장간균BL21,재숙주균중공표체탈경규니산합성매화규니산탈경매.결과:획득료포함pETDuet-aroB-qutB공표체재체적중조대장간균.IPTG(0.5 mmol/L)유도중조균4 h후,탈경규니산합성매화규니산탈경매표체량분별점균체총단백적18.7%화30.5%,매활력위70.4 U/L、40.2 U/L,분별제고료14.1배화22.3배.결론:실현료탈경규니산합성매화규니산탈경매기인재대장간균중적고효공표체,위기인공정법생물합성규니산전정료기출.
