CAJ | 학술논문

用FRET技术研究TLR4和MD-2的相互作用
용FRET기술연구TLR4화MD-2적상호작용
Analysis of Toll-like receptor 4 and myeloid differentiation protein-2 interaction with fluorescence resonance energy transfer

万方数据

南方医科大学学报南方醫科大學學報 남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2006年 8期 1101-1105 ,共5页

刘亚伟%刘靖华%唐靖%赵清%李建军%赵明哲%李志杰%王国军%钟田雨%邓鹏%姜勇

류아위%류정화%당정%조청%리건군%조명철%리지걸%왕국군%종전우%산붕%강용

Toll样受体4%髓样细胞分化蛋白2%荧光共振能量转移 Toll樣受體4%髓樣細胞分化蛋白2%熒光共振能量轉移
Toll양수체4%수양세포분화단백2%형광공진능량전이

目的利用荧光共振能量转移(FRET)技术在活体细胞研究人Toll样受体(TLR)4与髓样细胞分化蛋白2(MD-2)的相互作用.方法用PCR方法扩增TLR4编码序列和MD-2编码序列(不包括信号肽序列)并分别亚克隆入带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白和增强型黄色荧光蛋白表达载体(pECFP-C1-SP,pEYFP-C1-SP)中,重组质粒经酶切、序列鉴定分析后分别或共同转染HEK293细胞,用荧光显微镜观察荧光蛋白表达和分布情况,并用常规的方法和受体光漂白的方法对共表达青色荧光蛋白(CFP)-TLR4和黄色荧光蛋白(YFP)-MD-2的细胞进行FRET分析.结果重组质粒在HEK293细胞中得到表达,仅转染pECFP/TLR4或pEYFP/MD-2的细胞可见青色或黄色荧光主要分布在胞质内,以核周较多;而共转染pECFP/TLR4和pEYFP/MD-2的细胞可同时检测到青色和黄色荧光,主要分布在细胞膜,同时胞质也有少量表达.无论是用常规的方法还是受体光漂白的方法,对共表达CFP-TLR4和YFP-MD-2的细胞进行FRET分析结果表明有FRET现象的发生,提示TLR4和MD-2有相互作用并形成复合物.结论本研究为TLR4和MD-2在活体细胞中的相互作用提供了直接的证据.
목적 이용형광공진능량전이(FRET)기술재활체세포연구인Toll양수체(TLR)4여수양세포분화단백2(MD-2)적상호작용.방법 용PCR방법확증TLR4편마서렬화MD-2편마서렬(불포괄신호태서렬)병분별아극륭입대TLR4신호태적증강형청색형광단백화증강형황색형광단백표체재체(pECFP-C1-SP,pEYFP-C1-SP)중,중조질립경매절、서렬감정분석후분별혹공동전염HEK293세포,용형광현미경관찰형광단백표체화분포정황,병용상규적방법화수체광표백적방법대공표체청색형광단백(CFP)-TLR4화황색형광단백(YFP)-MD-2적세포진행FRET분석.결과 중조질립재HEK293세포중득도표체,부전염pECFP/TLR4혹pEYFP/MD-2적세포가견청색혹황색형광주요분포재포질내,이핵주교다;이공전염pECFP/TLR4화pEYFP/MD-2적세포가동시검측도청색화황색형광,주요분포재세포막,동시포질야유소량표체.무론시용상규적방법환시수체광표백적방법,대공표체CFP-TLR4화YFP-MD-2적세포진행FRET분석결과표명유FRET현상적발생,제시TLR4화MD-2유상호작용병형성복합물.결론 본연구위TLR4화MD-2재활체세포중적상호작용제공료직접적증거.