上海交通大学学报（医学版）
上海交通大學學報（醫學版）
상해교통대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE)
2007年
6期
693-695
,共3页
林才%罗旭%辛国华%黄来剑%邱泽亮
林纔%囉旭%辛國華%黃來劍%邱澤亮
림재%라욱%신국화%황래검%구택량
成体表皮干细胞%细胞培养%细胞分离%鉴定
成體錶皮榦細胞%細胞培養%細胞分離%鑒定
성체표피간세포%세포배양%세포분리%감정
目的 探讨人表皮干细胞的体外快速分离和培养方法.方法 运用Dispase Ⅱ酶和胰蛋白酶两步法从手术切除的人包皮组织中分离获得表皮干细胞.分离的表皮片经表皮干细胞培养基(ESCM)悬浮,接种于IV型胶原包被的培养板中,37 ℃、5%CO2 饱和湿度的细胞培养箱内静置培养10 min,留用贴壁细胞;Ⅳ型胶原黏附、分离并富集后继续培养.倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况;检测细胞克隆形成率及克隆维持时间;免疫组化染色观察表皮干细胞标志物β1整合素和角蛋白19(K19)的表达.以角质形成细胞作为对照.结果 组织学观察显示,培养24 h后细胞呈克隆状生长;所分离、培养细胞的克隆形成率高于对照角质形成细胞,且克隆维持时间较长; 免疫组化染色显示,培养细胞β1整合素及Kl9均呈阳性表达.结论 运用Ⅳ型胶原黏附结合ESCM培养可以实现人成体表皮干细胞的快速分离和培养.
目的 探討人錶皮榦細胞的體外快速分離和培養方法.方法 運用Dispase Ⅱ酶和胰蛋白酶兩步法從手術切除的人包皮組織中分離穫得錶皮榦細胞.分離的錶皮片經錶皮榦細胞培養基(ESCM)懸浮,接種于IV型膠原包被的培養闆中,37 ℃、5%CO2 飽和濕度的細胞培養箱內靜置培養10 min,留用貼壁細胞;Ⅳ型膠原黏附、分離併富集後繼續培養.倒置顯微鏡下觀察培養細胞的生長狀況;檢測細胞剋隆形成率及剋隆維持時間;免疫組化染色觀察錶皮榦細胞標誌物β1整閤素和角蛋白19(K19)的錶達.以角質形成細胞作為對照.結果 組織學觀察顯示,培養24 h後細胞呈剋隆狀生長;所分離、培養細胞的剋隆形成率高于對照角質形成細胞,且剋隆維持時間較長; 免疫組化染色顯示,培養細胞β1整閤素及Kl9均呈暘性錶達.結論 運用Ⅳ型膠原黏附結閤ESCM培養可以實現人成體錶皮榦細胞的快速分離和培養.
목적 탐토인표피간세포적체외쾌속분리화배양방법.방법 운용Dispase Ⅱ매화이단백매량보법종수술절제적인포피조직중분리획득표피간세포.분리적표피편경표피간세포배양기(ESCM)현부,접충우IV형효원포피적배양판중,37 ℃、5%CO2 포화습도적세포배양상내정치배양10 min,류용첩벽세포;Ⅳ형효원점부、분리병부집후계속배양.도치현미경하관찰배양세포적생장상황;검측세포극륭형성솔급극륭유지시간;면역조화염색관찰표피간세포표지물β1정합소화각단백19(K19)적표체.이각질형성세포작위대조.결과 조직학관찰현시,배양24 h후세포정극륭상생장;소분리、배양세포적극륭형성솔고우대조각질형성세포,차극륭유지시간교장; 면역조화염색현시,배양세포β1정합소급Kl9균정양성표체.결론 운용Ⅳ형효원점부결합ESCM배양가이실현인성체표피간세포적쾌속분리화배양.
