CAJ | 학술논문

目的:观察大鼠脂肪间充质干细胞经成骨诱导向成骨细胞分化的生物学特性,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性.方法:实验于2004-07/2006-03在中南大学湘雅医院中心实验室完成主要工作.①取健康SD大鼠双侧腹股沟区脂肪垫,消化法分离出脂肪间充质干细胞,接种入含有体积分数为0.1的新生牛血清的低糖DMEM培养基进行原代培养.②取第3代的脂肪间充质干细胞,用含有体积分数为0.1的新生牛血清、0.1μmol/L地塞米松、50μmol/L抗坏血酸、10 mmol/L β-甘油磷酸钠的高糖DMEM培养基诱导其向成骨细胞分化.③于3,5,7,10,12,14,21 d分别采用倒置显微镜观察细胞形态及增殖情况、Gomori改良钙钴法碱性磷酸酶染色、茜素红S钙结节染色和Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色检测脂肪间充质干细胞成骨分化的情况.结果:①脂肪间充质干细胞原代细胞呈成纤维细胞样长梭形外观,传代稳定,细胞形态均一.②经成骨诱导,脂肪间充质干细胞体积增大,呈多角形;成骨诱导14 d,Gomori改良钙钴法碱性磷酸酶染色,细胞胞浆内可见浅棕色至棕黑色的颗粒,平均染色阳性率为80%;碱性磷酸酶活性随时间的延长而逐渐增高[3,5,7,10,12,14 d依次为(2.43±0.09),(3.60±0.08),(5.01±0.09),(7.75±0.07),(9.59±0.09),(10.94±0.10)μkat/L];成骨诱导21 d,钙结节形成明显,茜素红S染色,呈红色结节;成骨诱导7 d,Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色,细胞胞浆呈棕黄色,胞核经苏木精复染为蓝色.结论:大鼠脂肪间充质干细胞经成骨诱导具有成骨细胞的生物学特性,可作为骨组织工程的种子细胞.
목적:관찰대서지방간충질간세포경성골유도향성골세포분화적생물학특성,탐토기작위골조직공정충자세포적가행성.방법:실험우2004-07/2006-03재중남대학상아의원중심실험실완성주요공작.①취건강SD대서쌍측복고구구지방점,소화법분리출지방간충질간세포,접충입함유체적분수위0.1적신생우혈청적저당DMEM배양기진행원대배양.②취제3대적지방간충질간세포,용함유체적분수위0.1적신생우혈청、0.1μmol/L지새미송、50μmol/L항배혈산、10 mmol/L β-감유린산납적고당DMEM배양기유도기향성골세포분화.③우3,5,7,10,12,14,21 d분별채용도치현미경관찰세포형태급증식정황、Gomori개량개고법감성린산매염색、천소홍S개결절염색화Ⅰ형효원면역세포화학염색검측지방간충질간세포성골분화적정황.결과:①지방간충질간세포원대세포정성섬유세포양장사형외관,전대은정,세포형태균일.②경성골유도,지방간충질간세포체적증대,정다각형;성골유도14 d,Gomori개량개고법감성린산매염색,세포포장내가견천종색지종흑색적과립,평균염색양성솔위80%;감성린산매활성수시간적연장이축점증고[3,5,7,10,12,14 d의차위(2.43±0.09),(3.60±0.08),(5.01±0.09),(7.75±0.07),(9.59±0.09),(10.94±0.10)μkat/L];성골유도21 d,개결절형성명현,천소홍S염색,정홍색결절;성골유도7 d,Ⅰ형효원면역세포화학염색,세포포장정종황색,포핵경소목정복염위람색.결론:대서지방간충질간세포경성골유도구유성골세포적생물학특성,가작위골조직공정적충자세포.