中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2008年
3期
194-199
,共6页
江杨华%杨月珍%朱娟莉%陈超
江楊華%楊月珍%硃娟莉%陳超
강양화%양월진%주연리%진초
细胞色素P450 CYP2D6%多态性,单核苷酸%突变%半数抑制浓度
細胞色素P450 CYP2D6%多態性,單覈苷痠%突變%半數抑製濃度
세포색소P450 CYP2D6%다태성,단핵감산%돌변%반수억제농도
目的 探讨单核苷酸替换对人细胞色素P450 CYP2D6酶活性及其与药物相互作用的影响.方法 体外构建CYP 2D6野生株(WT)和G169R、P34S、E410K、V7M等4个单核苷酸突变株的表达载体并在酿酒酵母中诱导表达,裂解并提取各酶的蛋白微粒体,用蛋白质印迹法验证其表达,再分别测定各酶代谢底物丁夫洛尔和3-[2-(N,N二乙基-N-甲铵)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素(AMMC)的米氏常数(Km)和最大酶促反应速度(Vmax). 以AMMC为底物对CYP 2D6 WT和V7M、G169R进行高通量药物抑制实验,所选药物包括已知的2D6抑制剂(奎尼丁、舍曲林)、底物(氯丙嗪、氟西汀、阿米替林)和既非抑制剂又非底物的化合物(酮康唑、曲格列酮),求得不同药物对不同酶的半数抑制浓度(IC50).结果 蛋白质印迹法检测显示各酶均表达良好.CYP2D6WT代谢丁呋洛尔和AMMC的Km值分别为19.22、2.06 μmol-L-1,Vmax值分别为154.53、21.60 pmol·min-1·mg-1,Vmax/Km值分别为8.04、11.49山.min-1·mg-1.与CYP2D6WT比较,V7M代谢2种底物的Vmax值均要高得多(P<0.05),G169R和E410K均稍低,而P34S都要低很多(P<0.05);各突变株的Km值也发生了或多或少的改变.药物对CYP2D6 WT和V7M和G169R的抑制程度排序均为奎尼丁>氯丙嗪>氟西汀>阿米替林>舍曲林>酮康唑/曲格列酮;药物对V7M和G169R的IC50值与CYP2D6 WT的IC50值比值,奎尼丁分别为0.88和0.80,氯丙嗪0.54和0.80, 氟西汀0.65和1.02,阿米替林0.85和0.71,舍曲林0.43和0.74.结论 CYP2D6部分单核苷酸突变株的酶动力学特征与野生株有明显差异,单核苷酸替换可导致酶对药物抑制的敏感性发生变化.
目的 探討單覈苷痠替換對人細胞色素P450 CYP2D6酶活性及其與藥物相互作用的影響.方法 體外構建CYP 2D6野生株(WT)和G169R、P34S、E410K、V7M等4箇單覈苷痠突變株的錶達載體併在釀酒酵母中誘導錶達,裂解併提取各酶的蛋白微粒體,用蛋白質印跡法驗證其錶達,再分彆測定各酶代謝底物丁伕洛爾和3-[2-(N,N二乙基-N-甲銨)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素(AMMC)的米氏常數(Km)和最大酶促反應速度(Vmax). 以AMMC為底物對CYP 2D6 WT和V7M、G169R進行高通量藥物抑製實驗,所選藥物包括已知的2D6抑製劑(奎尼丁、捨麯林)、底物(氯丙嗪、氟西汀、阿米替林)和既非抑製劑又非底物的化閤物(酮康唑、麯格列酮),求得不同藥物對不同酶的半數抑製濃度(IC50).結果 蛋白質印跡法檢測顯示各酶均錶達良好.CYP2D6WT代謝丁呋洛爾和AMMC的Km值分彆為19.22、2.06 μmol-L-1,Vmax值分彆為154.53、21.60 pmol·min-1·mg-1,Vmax/Km值分彆為8.04、11.49山.min-1·mg-1.與CYP2D6WT比較,V7M代謝2種底物的Vmax值均要高得多(P<0.05),G169R和E410K均稍低,而P34S都要低很多(P<0.05);各突變株的Km值也髮生瞭或多或少的改變.藥物對CYP2D6 WT和V7M和G169R的抑製程度排序均為奎尼丁>氯丙嗪>氟西汀>阿米替林>捨麯林>酮康唑/麯格列酮;藥物對V7M和G169R的IC50值與CYP2D6 WT的IC50值比值,奎尼丁分彆為0.88和0.80,氯丙嗪0.54和0.80, 氟西汀0.65和1.02,阿米替林0.85和0.71,捨麯林0.43和0.74.結論 CYP2D6部分單覈苷痠突變株的酶動力學特徵與野生株有明顯差異,單覈苷痠替換可導緻酶對藥物抑製的敏感性髮生變化.
목적 탐토단핵감산체환대인세포색소P450 CYP2D6매활성급기여약물상호작용적영향.방법 체외구건CYP 2D6야생주(WT)화G169R、P34S、E410K、V7M등4개단핵감산돌변주적표체재체병재양주효모중유도표체,렬해병제취각매적단백미립체,용단백질인적법험증기표체,재분별측정각매대사저물정부락이화3-[2-(N,N이을기-N-갑안)을기]-7-갑양기-4-갑기향두소(AMMC)적미씨상수(Km)화최대매촉반응속도(Vmax). 이AMMC위저물대CYP 2D6 WT화V7M、G169R진행고통량약물억제실험,소선약물포괄이지적2D6억제제(규니정、사곡림)、저물(록병진、불서정、아미체림)화기비억제제우비저물적화합물(동강서、곡격렬동),구득불동약물대불동매적반수억제농도(IC50).결과 단백질인적법검측현시각매균표체량호.CYP2D6WT대사정부락이화AMMC적Km치분별위19.22、2.06 μmol-L-1,Vmax치분별위154.53、21.60 pmol·min-1·mg-1,Vmax/Km치분별위8.04、11.49산.min-1·mg-1.여CYP2D6WT비교,V7M대사2충저물적Vmax치균요고득다(P<0.05),G169R화E410K균초저,이P34S도요저흔다(P<0.05);각돌변주적Km치야발생료혹다혹소적개변.약물대CYP2D6 WT화V7M화G169R적억제정도배서균위규니정>록병진>불서정>아미체림>사곡림>동강서/곡격렬동;약물대V7M화G169R적IC50치여CYP2D6 WT적IC50치비치,규니정분별위0.88화0.80,록병진0.54화0.80, 불서정0.65화1.02,아미체림0.85화0.71,사곡림0.43화0.74.결론 CYP2D6부분단핵감산돌변주적매동역학특정여야생주유명현차이,단핵감산체환가도치매대약물억제적민감성발생변화.
