华中科技大学学报(医学版)
華中科技大學學報(醫學版)
화중과기대학학보(의학판)
JOURNAL OF HUAZHONG UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(HEALTH SCIENCES)
2012年
1期
22-26
,共5页
黄加权%焦云桃%李兰%徐蕾%陶然%范翔雪%马科%郭威%宁琴
黃加權%焦雲桃%李蘭%徐蕾%陶然%範翔雪%馬科%郭威%寧琴
황가권%초운도%리란%서뢰%도연%범상설%마과%곽위%저금
小干扰RNA%结缔组织生长因子%组织金属蛋白酶抑制剂-1%肝星状细胞%Ⅰ、Ⅲ型胶原
小榦擾RNA%結締組織生長因子%組織金屬蛋白酶抑製劑-1%肝星狀細胞%Ⅰ、Ⅲ型膠原
소간우RNA%결체조직생장인자%조직금속단백매억제제-1%간성상세포%Ⅰ、Ⅲ형효원
目的 研究小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-1)对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)CTGF和TIMP-1基因表达以及对Ⅰ、Ⅲ型胶原分泌的影响.方法 根据已筛选出的对CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA干扰靶位,将化学合成siRNA CTGF和siRNA TIMP-1以脂质体LipofectamineTM2000介导,瞬时转染HSC-T6细胞,分别设siRNA CTGF组、siRNA TIMP-1组、siRNA CTGF和siRNA TIMP-1联合组、脂质体组及非特异性(negative control,NC)siRNA组,抽提转染24、48 h细胞mRNA和蛋白,并收集细胞上清液.应用RT-PCR鉴定CTGF和TIMP-1 mRNA的表达;Western blot检测其蛋白表达;ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的分泌.结果 各干预组转染24、48 h后分别与脂质体组和NC siRNA组比较,HSC-T6细胞CTGF及TIMP-1 mRNA和蛋白表达均明显下调(均P＜0.05),且干预组HSC-T6培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量明显减少(均P＜0.05).siRNA联合组分别与siRNA CTGF组和siRNA TIMP-1组比较,于转染48 h siRNA联合组较siRNA TIMP-1组抑制率高,细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原量比siRNA TIMP-1组少,且差异具有统计学意义(均P＜0.05);而与siRNA CTGF组比较,其CTGF mRNA和蛋白抑制率增高,细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原量较siRNA联合组减少,但差异无统计学意义(均P＞0.05).结论针对HSC-T6 CTGF mRNA基因全长943位点和TIMP-1 mRNA 304位点化学合成的siRNA,对靶基因mRNA和蛋白表达有较好的抑制效果,CTGF和TIMP-1 沉默可显著减少细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;CTGF和TIMP-1两种基因同时沉默,有增强抗肝纤维化效果的可能.
目的 研究小榦擾RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默結締組織生長因子(connective tissue growth factor,CTGF)和組織金屬蛋白酶抑製劑-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-1)對肝星狀細胞(hepatic stellate cell,HSC)CTGF和TIMP-1基因錶達以及對Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌的影響.方法 根據已篩選齣的對CTGF和TIMP-1基因最有效的RNA榦擾靶位,將化學閤成siRNA CTGF和siRNA TIMP-1以脂質體LipofectamineTM2000介導,瞬時轉染HSC-T6細胞,分彆設siRNA CTGF組、siRNA TIMP-1組、siRNA CTGF和siRNA TIMP-1聯閤組、脂質體組及非特異性(negative control,NC)siRNA組,抽提轉染24、48 h細胞mRNA和蛋白,併收集細胞上清液.應用RT-PCR鑒定CTGF和TIMP-1 mRNA的錶達;Western blot檢測其蛋白錶達;ELISA法檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原的分泌.結果 各榦預組轉染24、48 h後分彆與脂質體組和NC siRNA組比較,HSC-T6細胞CTGF及TIMP-1 mRNA和蛋白錶達均明顯下調(均P＜0.05),且榦預組HSC-T6培養上清液中Ⅰ、Ⅲ型膠原含量明顯減少(均P＜0.05).siRNA聯閤組分彆與siRNA CTGF組和siRNA TIMP-1組比較,于轉染48 h siRNA聯閤組較siRNA TIMP-1組抑製率高,細胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型膠原量比siRNA TIMP-1組少,且差異具有統計學意義(均P＜0.05);而與siRNA CTGF組比較,其CTGF mRNA和蛋白抑製率增高,細胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型膠原量較siRNA聯閤組減少,但差異無統計學意義(均P＞0.05).結論針對HSC-T6 CTGF mRNA基因全長943位點和TIMP-1 mRNA 304位點化學閤成的siRNA,對靶基因mRNA和蛋白錶達有較好的抑製效果,CTGF和TIMP-1 沉默可顯著減少細胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型膠原含量;CTGF和TIMP-1兩種基因同時沉默,有增彊抗肝纖維化效果的可能.
목적 연구소간우RNA(small interfering RNA,siRNA)침묵결체조직생장인자(connective tissue growth factor,CTGF)화조직금속단백매억제제-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases,TIMP-1)대간성상세포(hepatic stellate cell,HSC)CTGF화TIMP-1기인표체이급대Ⅰ、Ⅲ형효원분비적영향.방법 근거이사선출적대CTGF화TIMP-1기인최유효적RNA간우파위,장화학합성siRNA CTGF화siRNA TIMP-1이지질체LipofectamineTM2000개도,순시전염HSC-T6세포,분별설siRNA CTGF조、siRNA TIMP-1조、siRNA CTGF화siRNA TIMP-1연합조、지질체조급비특이성(negative control,NC)siRNA조,추제전염24、48 h세포mRNA화단백,병수집세포상청액.응용RT-PCR감정CTGF화TIMP-1 mRNA적표체;Western blot검측기단백표체;ELISA법검측Ⅰ、Ⅲ형효원적분비.결과 각간예조전염24、48 h후분별여지질체조화NC siRNA조비교,HSC-T6세포CTGF급TIMP-1 mRNA화단백표체균명현하조(균P＜0.05),차간예조HSC-T6배양상청액중Ⅰ、Ⅲ형효원함량명현감소(균P＜0.05).siRNA연합조분별여siRNA CTGF조화siRNA TIMP-1조비교,우전염48 h siRNA연합조교siRNA TIMP-1조억제솔고,세포상청액중Ⅰ、Ⅲ형효원량비siRNA TIMP-1조소,차차이구유통계학의의(균P＜0.05);이여siRNA CTGF조비교,기CTGF mRNA화단백억제솔증고,세포상청액중Ⅰ、Ⅲ형효원량교siRNA연합조감소,단차이무통계학의의(균P＞0.05).결론침대HSC-T6 CTGF mRNA기인전장943위점화TIMP-1 mRNA 304위점화학합성적siRNA,대파기인mRNA화단백표체유교호적억제효과,CTGF화TIMP-1 침묵가현저감소세포상청액중Ⅰ、Ⅲ형효원함량;CTGF화TIMP-1량충기인동시침묵,유증강항간섬유화효과적가능.
