解剖科学进展
解剖科學進展
해부과학진전
PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES
2012年
5期
427-430,434
,共5页
刘琦%刘杏%高锦兰%胡西华%罗阳
劉琦%劉杏%高錦蘭%鬍西華%囉暘
류기%류행%고금란%호서화%라양
DOC-1R%逆转录病毒表达载体%外源表达%转染
DOC-1R%逆轉錄病毒錶達載體%外源錶達%轉染
DOC-1R%역전록병독표체재체%외원표체%전염
目的 构建人DOC-1R基因重组逆转录病毒表达载体,实现该基因在体外培养细胞中的大量表达,从而研究表达蛋白的功能.方法 通过重组技术将含有FLAG标签序列的DOC-1RcDNA编码区全长克隆至逆转录病毒载体pLXSN,菌落PCR鉴定、限制性内切酶双酶切及测序验证重组载体的构建.将重组载体转染至GP-293细胞进行病毒包装并以所包装的病毒感染HeLa细胞,通过Western blot及间接免疫荧光染色检测重组DOC-1R蛋白的表达及细胞内定位.结果 测序结果表明重组载体中插入的重组片段序列及开放阅读框架正确,逆转录病毒表达载体pLXSN-FLAG-DOC-1R成功构建.Western blot及间接免疫荧光染色结果证实,逆转录病毒介导的重组DOC-1R蛋白在HeLa细胞中高效表达,表达效率明显高于真核表达载体介导的重组蛋白表达.结论 DOC-1R基因逆转录病毒表达载体成功构建,重组蛋白在体外培养细胞正确高效表达.
目的 構建人DOC-1R基因重組逆轉錄病毒錶達載體,實現該基因在體外培養細胞中的大量錶達,從而研究錶達蛋白的功能.方法 通過重組技術將含有FLAG標籤序列的DOC-1RcDNA編碼區全長剋隆至逆轉錄病毒載體pLXSN,菌落PCR鑒定、限製性內切酶雙酶切及測序驗證重組載體的構建.將重組載體轉染至GP-293細胞進行病毒包裝併以所包裝的病毒感染HeLa細胞,通過Western blot及間接免疫熒光染色檢測重組DOC-1R蛋白的錶達及細胞內定位.結果 測序結果錶明重組載體中插入的重組片段序列及開放閱讀框架正確,逆轉錄病毒錶達載體pLXSN-FLAG-DOC-1R成功構建.Western blot及間接免疫熒光染色結果證實,逆轉錄病毒介導的重組DOC-1R蛋白在HeLa細胞中高效錶達,錶達效率明顯高于真覈錶達載體介導的重組蛋白錶達.結論 DOC-1R基因逆轉錄病毒錶達載體成功構建,重組蛋白在體外培養細胞正確高效錶達.
목적 구건인DOC-1R기인중조역전록병독표체재체,실현해기인재체외배양세포중적대량표체,종이연구표체단백적공능.방법 통과중조기술장함유FLAG표첨서렬적DOC-1RcDNA편마구전장극륭지역전록병독재체pLXSN,균락PCR감정、한제성내절매쌍매절급측서험증중조재체적구건.장중조재체전염지GP-293세포진행병독포장병이소포장적병독감염HeLa세포,통과Western blot급간접면역형광염색검측중조DOC-1R단백적표체급세포내정위.결과 측서결과표명중조재체중삽입적중조편단서렬급개방열독광가정학,역전록병독표체재체pLXSN-FLAG-DOC-1R성공구건.Western blot급간접면역형광염색결과증실,역전록병독개도적중조DOC-1R단백재HeLa세포중고효표체,표체효솔명현고우진핵표체재체개도적중조단백표체.결론 DOC-1R기인역전록병독표체재체성공구건,중조단백재체외배양세포정학고효표체.
