CAJ | 학술논문

通过差速离心和蔗糖密度梯度离心,从感染了白斑综合症病毒(WSSV)的病虾头胸部分离了WSSV,利用地高辛对病毒蛋白进行了标记(DIG-WSSV),以体外培养的对虾血淋巴细胞为吸附基底,观察和分析了病毒与细胞间的结合现象及特性.以NBT/BCIP为酶反应显色底物观察到在细胞周围形成许多暗紫色颗粒,证实病毒与细胞间存在着稳定的结合.以OPD为酶反应显色底物分析了结合反应的特性:当DIG-WSSV维持恒定值时,随着血淋巴细胞数量的增加结合显色增强,细胞数量达到1.2×104 cells/孔,492nm处的吸光值达到饱和;当血淋巴细胞数量维持恒定值时,随着DIG-WSSV蛋白含量的增加显色增强,且在DIG-WSSV的蛋白浓度达到4μg/孔时,492nm处的吸光值达到饱和;未标记WSSV可竞争抑制血淋巴细胞与DIG-WSSV间的结合作用.进一步的研究得出:4℃下,随着结合时间的延长显色增强,但继续延长结合时间显色反而减弱;缓冲液的渗透压对结合结果影响甚微,而酸性条件利于病毒与细胞间的结合.37℃孵育对病毒结合活性影响不大,55℃和70℃孵育可显著影响病毒的结合活性;短时间超声波处理病毒可增加病毒结合能力,长时间超声波处理可破坏病毒结合能力;有机溶剂处理同样可破坏病毒结合能力,其中尤以氯仿/甲醇的处理更为激烈;不同的去垢剂对病毒结合活性的影响结果不同:SDS和脱氧胆酸钠可以降低病毒的结合活性,而Triton X-100和NP-40可以提高病毒的结合活性.
통과차속리심화자당밀도제도리심,종감염료백반종합증병독(WSSV)적병하두흉부분리료WSSV,이용지고신대병독단백진행료표기(DIG-WSSV),이체외배양적대하혈림파세포위흡부기저,관찰화분석료병독여세포간적결합현상급특성.이NBT/BCIP위매반응현색저물관찰도재세포주위형성허다암자색과립,증실병독여세포간존재착은정적결합.이OPD위매반응현색저물분석료결합반응적특성:당DIG-WSSV유지항정치시,수착혈림파세포수량적증가결합현색증강,세포수량체도1.2×104 cells/공,492nm처적흡광치체도포화;당혈림파세포수량유지항정치시,수착DIG-WSSV단백함량적증가현색증강,차재DIG-WSSV적단백농도체도4μg/공시,492nm처적흡광치체도포화;미표기WSSV가경쟁억제혈림파세포여DIG-WSSV간적결합작용.진일보적연구득출:4℃하,수착결합시간적연장현색증강,단계속연장결합시간현색반이감약;완충액적삼투압대결합결과영향심미,이산성조건리우병독여세포간적결합.37℃부육대병독결합활성영향불대,55℃화70℃부육가현저영향병독적결합활성;단시간초성파처리병독가증가병독결합능력,장시간초성파처리가파배병독결합능력;유궤용제처리동양가파배병독결합능력,기중우이록방/갑순적처리경위격렬;불동적거구제대병독결합활성적영향결과불동:SDS화탈양담산납가이강저병독적결합활성,이Triton X-100화NP-40가이제고병독적결합활성.