中华肝脏病杂志
中華肝髒病雜誌
중화간장병잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
2004年
4期
201-204
,共4页
肝炎病毒,乙型%粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子%DNA疫苗%融合表达质粒
肝炎病毒,乙型%粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子%DNA疫苗%融閤錶達質粒
간염병독,을형%립세포-거서세포집락자격인자%DNA역묘%융합표체질립
目的研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的融合表达质粒免疫乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠及其病毒清除作用.方法将小鼠随机分为8组,分别注射以下质粒:A组pcDNA3.1-S 100μg;B组:pcDNA3.1-GM-CSF-S 100μg;C组:pcDNA3.1-S-GM-CSF 100μg;D组:pcDNA3.1-S 50μg+pcDNA3.1-GM-CSF 50μg;E组:pcDNA3.1-GM-CSF 100μg;F组:重组酵母乙型肝炎疫苗1μg; G组:pcDNA 3.1 100 μg;H组:磷酸盐缓冲液(PBS)100μl.于质粒注射前4 d肌肉注射0.25%bupivacaine溶液100 μ1,诱导骨骼肌细胞变性.以HBsAg和GM-CSF的融合乙型肝炎表达质粒免疫HBV转基因小鼠,检测HBV转基因小鼠血清HBsAg表达水平及肝细胞HBsAg的表达,检测脾细胞白细胞介素(IL)-2、IL-4及γ干扰素(IFN-γ)的分泌水平及淋巴细胞增殖情况,并进行肝组织学检查.结果质粒加强免疫4周后血清HBsAg检测结果A组为2 8.28±15.32、B组为10.77±9.18、C组为44.16±8.30、D组为21.93±13.28、E组48.04±3.60、F组为38.3±11.66、G组为47.03±3.96、H组为51.46±4.70,F=11.262,P＜0.01,其中B组血清HBsAg滴度显著低于其余各组.IL-2分泌水平(pg/m1)A组为25.5±7.5、B组为48.5±11.3、C组为4.0±2.5、D组为38.0±8.5、E组为3.7±2.1、F组为6.5±23.7、G组为1.8±1.0、H组为0,F=8.147,P＜0.01.IFN-γ分泌水平A组为71.0±23.2、B组为218.0±20.3、C组为20.0±13.5、D组为106.0±39.8、E组为18.0±10.5、F组为36.0±15.4、G组为5.0±4.0、H组为0,F=62.275,P＜0.01.淋巴细胞增殖反应结果A组为3.404±0.312、B组为4.69± 0.286、C组为1.390±0.065、D组为3.790±0.276、E组为1.480±0.067、F组为1.510±0.084、G组为1.290±0.123、H组为1.130±0.086,F=116.28,P＜0.01.肝细胞HBsAg的表达(黄棕色区面积/统计区总面积)结果A组为0.127±0.08 5、B组为0.029±0.046、C组为0.349±0.025、D组为0.075±0.039、E组为0.336±0.025、F组为0.292±0.069、G组为0.362±0.029、H组为0.394±0.059,F=41.439,P＜0.01.以上研究结果显示pcDNA3.1-GM-CSF-S免疫组血清HBsAg滴度及肝细胞HBsAg的表达水平显著低于pcDNA3.1-S免疫组,而pcDNA3.1-GM-CSF-S免疫组IL-2、FN-γ分泌水平均及淋巴细胞增殖反应均显著高于pcDNA3.1-S免疫组.各实验组及对照组均未见炎症细胞浸润、无肝细胞肿胀、变性及坏死.结论GM-CSF基因与HBsAg基因融合可增强HBsAg DNA疫苗对病毒的清除作用.
目的研究乙型肝炎錶麵抗原(HBsAg)和粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)的融閤錶達質粒免疫乙型肝炎病毒(HBV)轉基因小鼠及其病毒清除作用.方法將小鼠隨機分為8組,分彆註射以下質粒:A組pcDNA3.1-S 100μg;B組:pcDNA3.1-GM-CSF-S 100μg;C組:pcDNA3.1-S-GM-CSF 100μg;D組:pcDNA3.1-S 50μg+pcDNA3.1-GM-CSF 50μg;E組:pcDNA3.1-GM-CSF 100μg;F組:重組酵母乙型肝炎疫苗1μg; G組:pcDNA 3.1 100 μg;H組:燐痠鹽緩遲液(PBS)100μl.于質粒註射前4 d肌肉註射0.25%bupivacaine溶液100 μ1,誘導骨骼肌細胞變性.以HBsAg和GM-CSF的融閤乙型肝炎錶達質粒免疫HBV轉基因小鼠,檢測HBV轉基因小鼠血清HBsAg錶達水平及肝細胞HBsAg的錶達,檢測脾細胞白細胞介素(IL)-2、IL-4及γ榦擾素(IFN-γ)的分泌水平及淋巴細胞增殖情況,併進行肝組織學檢查.結果質粒加彊免疫4週後血清HBsAg檢測結果A組為2 8.28±15.32、B組為10.77±9.18、C組為44.16±8.30、D組為21.93±13.28、E組48.04±3.60、F組為38.3±11.66、G組為47.03±3.96、H組為51.46±4.70,F=11.262,P＜0.01,其中B組血清HBsAg滴度顯著低于其餘各組.IL-2分泌水平(pg/m1)A組為25.5±7.5、B組為48.5±11.3、C組為4.0±2.5、D組為38.0±8.5、E組為3.7±2.1、F組為6.5±23.7、G組為1.8±1.0、H組為0,F=8.147,P＜0.01.IFN-γ分泌水平A組為71.0±23.2、B組為218.0±20.3、C組為20.0±13.5、D組為106.0±39.8、E組為18.0±10.5、F組為36.0±15.4、G組為5.0±4.0、H組為0,F=62.275,P＜0.01.淋巴細胞增殖反應結果A組為3.404±0.312、B組為4.69± 0.286、C組為1.390±0.065、D組為3.790±0.276、E組為1.480±0.067、F組為1.510±0.084、G組為1.290±0.123、H組為1.130±0.086,F=116.28,P＜0.01.肝細胞HBsAg的錶達(黃棕色區麵積/統計區總麵積)結果A組為0.127±0.08 5、B組為0.029±0.046、C組為0.349±0.025、D組為0.075±0.039、E組為0.336±0.025、F組為0.292±0.069、G組為0.362±0.029、H組為0.394±0.059,F=41.439,P＜0.01.以上研究結果顯示pcDNA3.1-GM-CSF-S免疫組血清HBsAg滴度及肝細胞HBsAg的錶達水平顯著低于pcDNA3.1-S免疫組,而pcDNA3.1-GM-CSF-S免疫組IL-2、FN-γ分泌水平均及淋巴細胞增殖反應均顯著高于pcDNA3.1-S免疫組.各實驗組及對照組均未見炎癥細胞浸潤、無肝細胞腫脹、變性及壞死.結論GM-CSF基因與HBsAg基因融閤可增彊HBsAg DNA疫苗對病毒的清除作用.
목적연구을형간염표면항원(HBsAg)화립세포거서세포집락자격인자(GM-CSF)적융합표체질립면역을형간염병독(HBV)전기인소서급기병독청제작용.방법장소서수궤분위8조,분별주사이하질립:A조pcDNA3.1-S 100μg;B조:pcDNA3.1-GM-CSF-S 100μg;C조:pcDNA3.1-S-GM-CSF 100μg;D조:pcDNA3.1-S 50μg+pcDNA3.1-GM-CSF 50μg;E조:pcDNA3.1-GM-CSF 100μg;F조:중조효모을형간염역묘1μg; G조:pcDNA 3.1 100 μg;H조:린산염완충액(PBS)100μl.우질립주사전4 d기육주사0.25%bupivacaine용액100 μ1,유도골격기세포변성.이HBsAg화GM-CSF적융합을형간염표체질립면역HBV전기인소서,검측HBV전기인소서혈청HBsAg표체수평급간세포HBsAg적표체,검측비세포백세포개소(IL)-2、IL-4급γ간우소(IFN-γ)적분비수평급림파세포증식정황,병진행간조직학검사.결과질립가강면역4주후혈청HBsAg검측결과A조위2 8.28±15.32、B조위10.77±9.18、C조위44.16±8.30、D조위21.93±13.28、E조48.04±3.60、F조위38.3±11.66、G조위47.03±3.96、H조위51.46±4.70,F=11.262,P＜0.01,기중B조혈청HBsAg적도현저저우기여각조.IL-2분비수평(pg/m1)A조위25.5±7.5、B조위48.5±11.3、C조위4.0±2.5、D조위38.0±8.5、E조위3.7±2.1、F조위6.5±23.7、G조위1.8±1.0、H조위0,F=8.147,P＜0.01.IFN-γ분비수평A조위71.0±23.2、B조위218.0±20.3、C조위20.0±13.5、D조위106.0±39.8、E조위18.0±10.5、F조위36.0±15.4、G조위5.0±4.0、H조위0,F=62.275,P＜0.01.림파세포증식반응결과A조위3.404±0.312、B조위4.69± 0.286、C조위1.390±0.065、D조위3.790±0.276、E조위1.480±0.067、F조위1.510±0.084、G조위1.290±0.123、H조위1.130±0.086,F=116.28,P＜0.01.간세포HBsAg적표체(황종색구면적/통계구총면적)결과A조위0.127±0.08 5、B조위0.029±0.046、C조위0.349±0.025、D조위0.075±0.039、E조위0.336±0.025、F조위0.292±0.069、G조위0.362±0.029、H조위0.394±0.059,F=41.439,P＜0.01.이상연구결과현시pcDNA3.1-GM-CSF-S면역조혈청HBsAg적도급간세포HBsAg적표체수평현저저우pcDNA3.1-S면역조,이pcDNA3.1-GM-CSF-S면역조IL-2、FN-γ분비수평균급림파세포증식반응균현저고우pcDNA3.1-S면역조.각실험조급대조조균미견염증세포침윤、무간세포종창、변성급배사.결론GM-CSF기인여HBsAg기인융합가증강HBsAg DNA역묘대병독적청제작용.
