吉林大学学报（医学版）
吉林大學學報（醫學版）
길림대학학보（의학판）
JOURNAL OF JILIN UNIVERSITY(MEDICINE EDITION)
2008年
2期
221-225
,共5页
杨怀宁%徐卉%浦昀%于湘晖%张煜%赵大力%孙志伟
楊懷寧%徐卉%浦昀%于湘暉%張煜%趙大力%孫誌偉
양부저%서훼%포윤%우상휘%장욱%조대력%손지위
人免疫缺陷病毒%合成基因%基因表达%活性鉴定
人免疫缺陷病毒%閤成基因%基因錶達%活性鑒定
인면역결함병독%합성기인%기인표체%활성감정
目的:在原核表达载体系统中对HIV-1gp41/gp120和HIV-2gp125/gp36外膜蛋白多个抗原位点同源序列合成基因进行表达、纯化并鉴定其活性.方法:人工合成含HIV-1gp41的3个抗原位点、HIV-1gp120的2个抗原位点、HIV-2gp125的3个抗原位点和HIV-2gp36的1个抗原位点的串联基因,克隆到原核表达载体pRSETB中,构建重组表达质粒pRSETB-env,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,采用金属离子亲和层析技术纯化表达蛋白,逐渐降低尿素浓度使目的蛋白复性,免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定.结果:目的基因在BL21中有较高表达率,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见相对分子质量约44 000的蛋白带,与设计相对分子质量相符.免疫印迹、ELISA试验显示pRSETB-env质粒的HIV-1/2表达蛋白与HIV-1及HIV-2患者血清都能较好地结合,与其他患者血清无交叉反应.结论:成功构建了由HIV-1/2外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env,并在原核细胞中高效表达,表达蛋白经纯化后纯度较高,并具有良好特异性和活性.
目的:在原覈錶達載體繫統中對HIV-1gp41/gp120和HIV-2gp125/gp36外膜蛋白多箇抗原位點同源序列閤成基因進行錶達、純化併鑒定其活性.方法:人工閤成含HIV-1gp41的3箇抗原位點、HIV-1gp120的2箇抗原位點、HIV-2gp125的3箇抗原位點和HIV-2gp36的1箇抗原位點的串聯基因,剋隆到原覈錶達載體pRSETB中,構建重組錶達質粒pRSETB-env,用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導目的基因在大腸埃希菌BL21(DE3)中高效錶達,採用金屬離子親和層析技術純化錶達蛋白,逐漸降低尿素濃度使目的蛋白複性,免疫印跡和ELISA法分彆對錶達產物進行鑒定.結果:目的基因在BL21中有較高錶達率,純化後錶達蛋白經十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)可見相對分子質量約44 000的蛋白帶,與設計相對分子質量相符.免疫印跡、ELISA試驗顯示pRSETB-env質粒的HIV-1/2錶達蛋白與HIV-1及HIV-2患者血清都能較好地結閤,與其他患者血清無交扠反應.結論:成功構建瞭由HIV-1/2外膜蛋白多箇抗原位點串聯基因片段的錶達載體pRSETB-env,併在原覈細胞中高效錶達,錶達蛋白經純化後純度較高,併具有良好特異性和活性.
목적:재원핵표체재체계통중대HIV-1gp41/gp120화HIV-2gp125/gp36외막단백다개항원위점동원서렬합성기인진행표체、순화병감정기활성.방법:인공합성함HIV-1gp41적3개항원위점、HIV-1gp120적2개항원위점、HIV-2gp125적3개항원위점화HIV-2gp36적1개항원위점적천련기인,극륭도원핵표체재체pRSETB중,구건중조표체질립pRSETB-env,용이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도목적기인재대장애희균BL21(DE3)중고효표체,채용금속리자친화층석기술순화표체단백,축점강저뇨소농도사목적단백복성,면역인적화ELISA법분별대표체산물진행감정.결과:목적기인재BL21중유교고표체솔,순화후표체단백경십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)가견상대분자질량약44 000적단백대,여설계상대분자질량상부.면역인적、ELISA시험현시pRSETB-env질립적HIV-1/2표체단백여HIV-1급HIV-2환자혈청도능교호지결합,여기타환자혈청무교차반응.결론:성공구건료유HIV-1/2외막단백다개항원위점천련기인편단적표체재체pRSETB-env,병재원핵세포중고효표체,표체단백경순화후순도교고,병구유량호특이성화활성.
