华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2008年
4期
431-434
,共4页
郑丽端%童强松%蔡嘉斌%蒋国松%刘媛%董继华
鄭麗耑%童彊鬆%蔡嘉斌%蔣國鬆%劉媛%董繼華
정려단%동강송%채가빈%장국송%류원%동계화
缺氧诱导丝裂原因子%组织特异性%肺%基因表达
缺氧誘導絲裂原因子%組織特異性%肺%基因錶達
결양유도사렬원인자%조직특이성%폐%기인표체
目的 克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced itogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体.方法 采用 Western blot 法检测 HIMF 基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用 RT-PCR 法扩增全长 HIMF cDNA ,克隆至 T 载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点 EcoR Ⅰ ;重组子在阳离子脂质体 Lipofectamine 2000 的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞 NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞 MLE-12、血管内皮细胞 SVEC4-10,用 Western blot 及 RT-PCR 法检测细胞HIMF表达水平.结果 HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达.成功克隆了小鼠 HIMF 全长 cDNA(336 bp),与 GenBank 报道的序列一致.真核表达载体 pcDNA3.1-HIMF 转染细胞后,细胞内 HIMF mRNA 和蛋白水平均显著增高(P<0.01).结论 从小鼠肺组织中克隆出 HIMF 这一组织特异性基因,为深入研究 HIMF 的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础.
目的 剋隆小鼠肺組織特異性錶達基因缺氧誘導絲裂原因子(hypoxia-induced itogenic factor,HIMF),併構建其真覈錶達載體.方法 採用 Western blot 法檢測 HIMF 基因在小鼠不同髒器中的錶達;從小鼠肺組織中提取總RNA,採用 RT-PCR 法擴增全長 HIMF cDNA ,剋隆至 T 載體後進行覈痠序列分析,併將其正嚮插入到真覈錶達載體pcDNA3.1/Zeo(+)的限製性內切酶位點 EcoR Ⅰ ;重組子在暘離子脂質體 Lipofectamine 2000 的介導下瞬時轉染胚胎纖維母細胞 NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮細胞 MLE-12、血管內皮細胞 SVEC4-10,用 Western blot 及 RT-PCR 法檢測細胞HIMF錶達水平.結果 HIMF特異性錶達于小鼠肺組織,而其他髒器未見錶達.成功剋隆瞭小鼠 HIMF 全長 cDNA(336 bp),與 GenBank 報道的序列一緻.真覈錶達載體 pcDNA3.1-HIMF 轉染細胞後,細胞內 HIMF mRNA 和蛋白水平均顯著增高(P<0.01).結論 從小鼠肺組織中剋隆齣 HIMF 這一組織特異性基因,為深入研究 HIMF 的生物學功能及其在肺部疾病靶嚮性生物治療中的作用奠定瞭基礎.
목적 극륭소서폐조직특이성표체기인결양유도사렬원인자(hypoxia-induced itogenic factor,HIMF),병구건기진핵표체재체.방법 채용 Western blot 법검측 HIMF 기인재소서불동장기중적표체;종소서폐조직중제취총RNA,채용 RT-PCR 법확증전장 HIMF cDNA ,극륭지 T 재체후진행핵산서렬분석,병장기정향삽입도진핵표체재체pcDNA3.1/Zeo(+)적한제성내절매위점 EcoR Ⅰ ;중조자재양리자지질체 Lipofectamine 2000 적개도하순시전염배태섬유모세포 NIH/3T3、폐Ⅱ형상피세포 MLE-12、혈관내피세포 SVEC4-10,용 Western blot 급 RT-PCR 법검측세포HIMF표체수평.결과 HIMF특이성표체우소서폐조직,이기타장기미견표체.성공극륭료소서 HIMF 전장 cDNA(336 bp),여 GenBank 보도적서렬일치.진핵표체재체 pcDNA3.1-HIMF 전염세포후,세포내 HIMF mRNA 화단백수평균현저증고(P<0.01).결론 종소서폐조직중극륭출 HIMF 저일조직특이성기인,위심입연구 HIMF 적생물학공능급기재폐부질병파향성생물치료중적작용전정료기출.
