CAJ | 학술논문

目的构建一种新型三价抗ErbB2、抗CD16 BsAb.方法构建重组载体pET22b(+)/BsAb;转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组蛋白的表达,通过包涵体复性纯化蛋白.应用悬浮培养系统扩增稳定表达抗人CD16 scFv-Fc融合蛋白的CHO细胞株(CG5细胞)和稳定表达抗人ErbB2 scFv-Fc融合蛋白的CHO细胞株(HG2细胞),通过rProtein A Sepharose Fast Flow亲和层析柱纯化融合蛋白,应用流式细胞术分析BsAb的结合能力.结果该BsAb可在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体形式高效表达,通过对重组蛋白的复性可获得高纯度的蛋白;复性后的BsAb具有与其亲本抗体相似性的结合靶抗原的能力.结论新型三价抗ErbB2、抗CD16 BsAb能与高表达ErbB2的乳腺癌细胞系SKBR3细胞高亲和力结合和表达CD16的人外周血单个核细胞低亲和力结合.
목적 구건일충신형삼개항ErbB2、항CD16 BsAb.방법 구건중조재체pET22b(+)/BsAb;전화대장간균BL21(DE3),획득중조단백적표체,통과포함체복성순화단백.응용현부배양계통확증은정표체항인CD16 scFv-Fc융합단백적CHO세포주(CG5세포)화은정표체항인ErbB2 scFv-Fc융합단백적CHO세포주(HG2세포),통과rProtein A Sepharose Fast Flow친화층석주순화융합단백,응용류식세포술분석BsAb적결합능력.결과 해BsAb가재대장간균BL21(DE3)중이포함체형식고효표체,통과대중조단백적복성가획득고순도적단백;복성후적BsAb구유여기친본항체상사성적결합파항원적능력.결론 신형삼개항ErbB2、항CD16 BsAb능여고표체ErbB2적유선암세포계SKBR3세포고친화력결합화표체CD16적인외주혈단개핵세포저친화력결합.