中国实验动物学报
中國實驗動物學報
중국실험동물학보
ACTA LABORATORIUM ANIMALIS SCIENTIA SINICA
2009年
2期
125-129,彩插三
,共6页
张向利%赵铁柱%乔明明%杨璐%孙明%王传彬%田克恭%陈西钊
張嚮利%趙鐵柱%喬明明%楊璐%孫明%王傳彬%田剋恭%陳西釗
장향리%조철주%교명명%양로%손명%왕전빈%전극공%진서쇠
狂犬病病毒%糖蛋白%表达
狂犬病病毒%糖蛋白%錶達
광견병병독%당단백%표체
目的 表达狂犬病病毒糖蛋白(GP),用于狂犬病疫苗免疫抗体评估和狂犬病病毒糖蛋白功能的研究. 方法 采用分析软件,分析其可能的抗原表位,利用PCR方法 扩增狂犬病病毒SRV9疫苗株G蛋白抗原位点区域基因,PCR产物经EcoRI和SalI双酶切后,插入大肠埃希菌表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-6P-1/G87a和pGEX-6P-1/G100a.将重组质粒转化大肠埃希菌BL21感受态细胞中,在IPTG诱导下表达目的 蛋白,进行SDS-PAGE分析.表达蛋白进行电洗脱纯化和Western blot鉴定分析.结果 成功构建了pGEX-6P-1/G87a和pGEX-6P-1/G100a表达质粒,序列分析表明,插入片段大小分别为1314 bp和1275 bp.SDS-PAGE分析结果 证明,在大肠埃希菌系统中成功表达了狂犬病病毒部分糖蛋白,表达的融合蛋白含有GST标签,大小分别约为74×103和73×103.Western blot鉴定结果 表明,表达产物有抗原特异性并能与狂犬病病毒抗血清反应.结论 利用大肠埃希菌表达系统成功表达了狂犬病病毒部分糖蛋白,表达产物有良好的反应原性.
目的 錶達狂犬病病毒糖蛋白(GP),用于狂犬病疫苗免疫抗體評估和狂犬病病毒糖蛋白功能的研究. 方法 採用分析軟件,分析其可能的抗原錶位,利用PCR方法 擴增狂犬病病毒SRV9疫苗株G蛋白抗原位點區域基因,PCR產物經EcoRI和SalI雙酶切後,插入大腸埃希菌錶達載體pGEX-6P-1,構建重組錶達質粒pGEX-6P-1/G87a和pGEX-6P-1/G100a.將重組質粒轉化大腸埃希菌BL21感受態細胞中,在IPTG誘導下錶達目的 蛋白,進行SDS-PAGE分析.錶達蛋白進行電洗脫純化和Western blot鑒定分析.結果 成功構建瞭pGEX-6P-1/G87a和pGEX-6P-1/G100a錶達質粒,序列分析錶明,插入片段大小分彆為1314 bp和1275 bp.SDS-PAGE分析結果 證明,在大腸埃希菌繫統中成功錶達瞭狂犬病病毒部分糖蛋白,錶達的融閤蛋白含有GST標籤,大小分彆約為74×103和73×103.Western blot鑒定結果 錶明,錶達產物有抗原特異性併能與狂犬病病毒抗血清反應.結論 利用大腸埃希菌錶達繫統成功錶達瞭狂犬病病毒部分糖蛋白,錶達產物有良好的反應原性.
목적 표체광견병병독당단백(GP),용우광견병역묘면역항체평고화광견병병독당단백공능적연구. 방법 채용분석연건,분석기가능적항원표위,이용PCR방법 확증광견병병독SRV9역묘주G단백항원위점구역기인,PCR산물경EcoRI화SalI쌍매절후,삽입대장애희균표체재체pGEX-6P-1,구건중조표체질립pGEX-6P-1/G87a화pGEX-6P-1/G100a.장중조질립전화대장애희균BL21감수태세포중,재IPTG유도하표체목적 단백,진행SDS-PAGE분석.표체단백진행전세탈순화화Western blot감정분석.결과 성공구건료pGEX-6P-1/G87a화pGEX-6P-1/G100a표체질립,서렬분석표명,삽입편단대소분별위1314 bp화1275 bp.SDS-PAGE분석결과 증명,재대장애희균계통중성공표체료광견병병독부분당단백,표체적융합단백함유GST표첨,대소분별약위74×103화73×103.Western blot감정결과 표명,표체산물유항원특이성병능여광견병병독항혈청반응.결론 이용대장애희균표체계통성공표체료광견병병독부분당단백,표체산물유량호적반응원성.
