厦门大学学报（自然科学版）
廈門大學學報（自然科學版）
하문대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF XIAMEN UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2009年
5期
738-743
,共6页
蔡晶晶%杨明%蔡灵%郭庆%潘瑞珍%王克坚
蔡晶晶%楊明%蔡靈%郭慶%潘瑞珍%王剋堅
채정정%양명%채령%곽경%반서진%왕극견
黑鲷抗菌肽hepcidin AS-hepc2%毕赤酵母%分泌表达%抗菌活性
黑鯛抗菌肽hepcidin AS-hepc2%畢赤酵母%分泌錶達%抗菌活性
흑조항균태hepcidin AS-hepc2%필적효모%분비표체%항균활성
鱼类抗菌肽hepcidin具有广谱抗菌活性.利用PCR技术扩增获得了黑鲷抗菌肽hepcidin (AS-hepc2)的前体肽和成熟肽 cDNA 序列,片段大小约250 bp.将其与毕赤酵母(Pichia pastoris) pPIC9K 质粒连接,构建了分泌表达载体pPIC9K/AS-hepc2 .电击法转化重组表达载体,经过G418筛选和选择性培养基以及PCR鉴定,得到的克隆子都为Mut+.以甲醇诱导pPIC9K/AS-hepc2,分泌表达上清中获得10 ku左右的表达产物,与预期的目的蛋白黑鲷hepcidin的前体肽和成熟肽的大小相符.表达试验证明,随时间的延长,表达产物量增多,至120 h 达到高峰.表达产物具有很强的热稳定性.用抑菌圈法测定重组蛋白Pro-AS-hepc2 的抗菌活性,发现能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长.
魚類抗菌肽hepcidin具有廣譜抗菌活性.利用PCR技術擴增穫得瞭黑鯛抗菌肽hepcidin (AS-hepc2)的前體肽和成熟肽 cDNA 序列,片段大小約250 bp.將其與畢赤酵母(Pichia pastoris) pPIC9K 質粒連接,構建瞭分泌錶達載體pPIC9K/AS-hepc2 .電擊法轉化重組錶達載體,經過G418篩選和選擇性培養基以及PCR鑒定,得到的剋隆子都為Mut+.以甲醇誘導pPIC9K/AS-hepc2,分泌錶達上清中穫得10 ku左右的錶達產物,與預期的目的蛋白黑鯛hepcidin的前體肽和成熟肽的大小相符.錶達試驗證明,隨時間的延長,錶達產物量增多,至120 h 達到高峰.錶達產物具有很彊的熱穩定性.用抑菌圈法測定重組蛋白Pro-AS-hepc2 的抗菌活性,髮現能抑製革蘭氏暘性菌和革蘭氏陰性菌的生長.
어류항균태hepcidin구유엄보항균활성.이용PCR기술확증획득료흑조항균태hepcidin (AS-hepc2)적전체태화성숙태 cDNA 서렬,편단대소약250 bp.장기여필적효모(Pichia pastoris) pPIC9K 질립련접,구건료분비표체재체pPIC9K/AS-hepc2 .전격법전화중조표체재체,경과G418사선화선택성배양기이급PCR감정,득도적극륭자도위Mut+.이갑순유도pPIC9K/AS-hepc2,분비표체상청중획득10 ku좌우적표체산물,여예기적목적단백흑조hepcidin적전체태화성숙태적대소상부.표체시험증명,수시간적연장,표체산물량증다,지120 h 체도고봉.표체산물구유흔강적열은정성.용억균권법측정중조단백Pro-AS-hepc2 적항균활성,발현능억제혁란씨양성균화혁란씨음성균적생장.
