CAJ | 학술논문

目的:构建原核表达系统诱导获得携带绿色荧光的抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单链抗体,分析其靶向结合HER2阳性肿瘤细胞的功能,探讨其应用于HER2阳性肿瘤分子诊断与靶向治疗的可能性.方法:将绿色荧光蛋白基因与鼠源性人抗HER2单链抗体基因拼接成融合基因anti-HER2 ScFv-GFP,构建原核表达载体重组子pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP,转入大肠杆菌 E.coli TOP10诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot法鉴定,Ni2+-NTA亲和层析法纯化获得目的融合蛋白.将不同浓度的融合蛋白anti-HER2 ScFv-GFP分别与HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3、HER2阴性的MCF7混合,观察绿色荧光在不同癌细胞表面的分布.结果:成功获得长度为1539 bp的融合基因,原核表达系统pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP/TOP10成功构建并表达携带绿色荧光的抗HER2单链抗体,融合蛋白相对分子量大小约60 kDa.HER2阳性的SKBR3细胞表面有明显绿色荧光,细胞有皱缩现象,而HER2阴性MCF7被洗脱后无荧光.结论:携带绿色荧光的抗HER2单链抗体能牢固结合在HER2阳性的乳腺癌细胞SKBR3表面,绿色荧光可以起到报告作用.
목적:구건원핵표체계통유도획득휴대록색형광적항인표피생장인자수체2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)단련항체,분석기파향결합HER2양성종류세포적공능,탐토기응용우HER2양성종류분자진단여파향치료적가능성.방법:장록색형광단백기인여서원성인항HER2단련항체기인병접성융합기인anti-HER2 ScFv-GFP,구건원핵표체재체중조자pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP,전입대장간균 E.coli TOP10유도표체,SDS-PAGE화Western Blot법감정,Ni2+-NTA친화층석법순화획득목적융합단백.장불동농도적융합단백anti-HER2 ScFv-GFP분별여HER2양성적유선암세포SKBR3、HER2음성적MCF7혼합,관찰록색형광재불동암세포표면적분포.결과:성공획득장도위1539 bp적융합기인,원핵표체계통pBAD His B/anti-HER2-ScFv-GFP/TOP10성공구건병표체휴대록색형광적항HER2단련항체,융합단백상대분자량대소약60 kDa.HER2양성적SKBR3세포표면유명현록색형광,세포유추축현상,이HER2음성MCF7피세탈후무형광.결론:휴대록색형광적항HER2단련항체능뢰고결합재HER2양성적유선암세포SKBR3표면,록색형광가이기도보고작용.