CAJ | 학술논문

本研究旨在探讨具有PSMB5基因G322A突变且对蛋白酶体抑制剂硼替佐米耐药的T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病细胞系JurkatB与亲本Jurkat细胞的细胞生物学特性和蛋白质表达的差异,确认JurkatB5(硼替佐米筛选终浓度500 nmol/L)及JurkatB8(筛选终浓度800 nmol/L)细胞对硼替佐米的耐药性和对常规化疗药物的敏感性.采用台盼蓝拒染活细胞计数绘制生长曲线,应用软琼脂培养法观察细胞集落形成率,用流式细胞术行细胞周期分析,实时荧光定量RT-PCR检测多药耐药相关基因MDR1、LRP、MRP mRNA表达,采用含有720个蛋白抗体的Spri-ngBio抗体芯片检测细胞株间蛋白质表达差异.结果表明,JurkatB5和JurkatB8细胞与亲本Jurkat细胞相比,对硼替佐米48小时耐药倍数分别为33.52,39.04.48小时化疗药物杀伤实验表明,JurkatB5和JurkatB8细胞对柔红霉素、阿霉素、长春新碱、依托泊甙均无交叉耐药,耐药细胞株与亲本Jurkat细胞的增殖、集落形成和细胞周期分布差异无统计学意义(p>0.05).JurkatB5细胞与Jurkat细胞MDR1、LRP、MRP基因mRNA表达无显著差异(p>0.05).蛋白芯片杂交信号扫描共有264个可分析表达点,252个蛋白在3个细胞株中表达无明显差异(2倍以内),其中包括与多药耐药相关的15个蛋白.在JurkatB5或JurkatB8中较Jurkat细胞表达升高或降低2倍以上的蛋白共12个(细胞分裂周期蛋白34、细胞分裂周期蛋白37、CD34 Ⅱ型蛋白、基质金属蛋白酶-2、细胞黏合素、高尔基体复合物、内皮蛋白、组蛋白去乙酰化酶1、穿孔蛋白、促乳蛋白、维甲酸受体β、整合蛋白β1),但未发现在JurkatB5和JurkatB8中较Jurkat细胞中表达同时升高或降低2倍以上的蛋白.结论:具有PSMBS基因G322A突变且对硼佐米耐药的细胞株JurkatB与亲本Jurkat细胞相比较其常规细胞生物学特性无显著改变,无多药耐药表型及多药耐药相关基因的过表达.突变细胞株中大部分已知与耐药有关的蛋白与肿瘤细胞生长、增殖、凋亡、恶性程度、侵袭性相关蛋白表达与亲本细胞中的表达相比较均无显著差异. 本研究旨在探討具有PSMB5基因G322A突變且對蛋白酶體抑製劑硼替佐米耐藥的T淋巴母細胞淋巴瘤/白血病細胞繫JurkatB與親本Jurkat細胞的細胞生物學特性和蛋白質錶達的差異,確認JurkatB5(硼替佐米篩選終濃度500 nmol/L)及JurkatB8(篩選終濃度800 nmol/L)細胞對硼替佐米的耐藥性和對常規化療藥物的敏感性.採用檯盼藍拒染活細胞計數繪製生長麯線,應用軟瓊脂培養法觀察細胞集落形成率,用流式細胞術行細胞週期分析,實時熒光定量RT-PCR檢測多藥耐藥相關基因MDR1、LRP、MRP mRNA錶達,採用含有720箇蛋白抗體的Spri-ngBio抗體芯片檢測細胞株間蛋白質錶達差異.結果錶明,JurkatB5和JurkatB8細胞與親本Jurkat細胞相比,對硼替佐米48小時耐藥倍數分彆為33.52,39.04.48小時化療藥物殺傷實驗錶明,JurkatB5和JurkatB8細胞對柔紅黴素、阿黴素、長春新堿、依託泊甙均無交扠耐藥,耐藥細胞株與親本Jurkat細胞的增殖、集落形成和細胞週期分佈差異無統計學意義(p>0.05).JurkatB5細胞與Jurkat細胞MDR1、LRP、MRP基因mRNA錶達無顯著差異(p>0.05).蛋白芯片雜交信號掃描共有264箇可分析錶達點,252箇蛋白在3箇細胞株中錶達無明顯差異(2倍以內),其中包括與多藥耐藥相關的15箇蛋白.在JurkatB5或JurkatB8中較Jurkat細胞錶達升高或降低2倍以上的蛋白共12箇(細胞分裂週期蛋白34、細胞分裂週期蛋白37、CD34 Ⅱ型蛋白、基質金屬蛋白酶-2、細胞黏閤素、高爾基體複閤物、內皮蛋白、組蛋白去乙酰化酶1、穿孔蛋白、促乳蛋白、維甲痠受體β、整閤蛋白β1),但未髮現在JurkatB5和JurkatB8中較Jurkat細胞中錶達同時升高或降低2倍以上的蛋白.結論:具有PSMBS基因G322A突變且對硼佐米耐藥的細胞株JurkatB與親本Jurkat細胞相比較其常規細胞生物學特性無顯著改變,無多藥耐藥錶型及多藥耐藥相關基因的過錶達.突變細胞株中大部分已知與耐藥有關的蛋白與腫瘤細胞生長、增殖、凋亡、噁性程度、侵襲性相關蛋白錶達與親本細胞中的錶達相比較均無顯著差異.
본연구지재탐토구유PSMB5기인G322A돌변차대단백매체억제제붕체좌미내약적T림파모세포림파류/백혈병세포계JurkatB여친본Jurkat세포적세포생물학특성화단백질표체적차이,학인JurkatB5(붕체좌미사선종농도500 nmol/L)급JurkatB8(사선종농도800 nmol/L)세포대붕체좌미적내약성화대상규화료약물적민감성.채용태반람거염활세포계수회제생장곡선,응용연경지배양법관찰세포집락형성솔,용류식세포술행세포주기분석,실시형광정량RT-PCR검측다약내약상관기인MDR1、LRP、MRP mRNA표체,채용함유720개단백항체적Spri-ngBio항체심편검측세포주간단백질표체차이.결과표명,JurkatB5화JurkatB8세포여친본Jurkat세포상비,대붕체좌미48소시내약배수분별위33.52,39.04.48소시화료약물살상실험표명,JurkatB5화JurkatB8세포대유홍매소、아매소、장춘신감、의탁박대균무교차내약,내약세포주여친본Jurkat세포적증식、집락형성화세포주기분포차이무통계학의의(p>0.05).JurkatB5세포여Jurkat세포MDR1、LRP、MRP기인mRNA표체무현저차이(p>0.05).단백심편잡교신호소묘공유264개가분석표체점,252개단백재3개세포주중표체무명현차이(2배이내),기중포괄여다약내약상관적15개단백.재JurkatB5혹JurkatB8중교Jurkat세포표체승고혹강저2배이상적단백공12개(세포분렬주기단백34、세포분렬주기단백37、CD34 Ⅱ형단백、기질금속단백매-2、세포점합소、고이기체복합물、내피단백、조단백거을선화매1、천공단백、촉유단백、유갑산수체β、정합단백β1),단미발현재JurkatB5화JurkatB8중교Jurkat세포중표체동시승고혹강저2배이상적단백.결론:구유PSMBS기인G322A돌변차대붕좌미내약적세포주JurkatB여친본Jurkat세포상비교기상규세포생물학특성무현저개변,무다약내약표형급다약내약상관기인적과표체.돌변세포주중대부분이지여내약유관적단백여종류세포생장、증식、조망、악성정도、침습성상관단백표체여친본세포중적표체상비교균무현저차이.