中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2011年
6期
649-653
,共5页
宫宁%章华兵%方福德%常永生
宮寧%章華兵%方福德%常永生
궁저%장화병%방복덕%상영생
蛋白连接组织生长因子%过表达%腺病毒%饥饿
蛋白連接組織生長因子%過錶達%腺病毒%饑餓
단백련접조직생장인자%과표체%선병독%기아
目的 构建及鉴定蛋白连接组织生长因子(CTGF)基因过表达腺病毒,初步探究CTGF在糖脂代谢方面的功能.方法 克隆CTGF过表达质粒,定向克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV,PmeⅠ酶切线性化穿梭质粒转化改造的E.coliBJ5183(含腺病毒载体pAdEasy-1)感受态细菌产生重组腺病毒载体,用PacⅠ线性化重组质粒,回收转染293A细胞包装病毒颗粒,经过3轮扩增,感染肝原代细胞,观察感染效率及检测基因表达情况.通过对小鼠不同时间段的饥饿处理,提取肝脏RNA做RT-PCR,实时定量PCR检测CTGF基因在不同营养条件下的变化情况.结果 成功包装CTGF的腺病毒,感染效率达90％以上.CTGF在不同营养条件下表达情况不同,并且与糖脂代谢重要基因过氧化物酶体增值激活受体γ共激活因子1α表达情况一致.饥饿24h,CTGF上调(3.38±0.51)倍；饥饿48h,CTGF上调(5.26±1.25)倍(P＜0.05).结论 初步认定CTGF可能参与糖脂代谢.
目的 構建及鑒定蛋白連接組織生長因子(CTGF)基因過錶達腺病毒,初步探究CTGF在糖脂代謝方麵的功能.方法 剋隆CTGF過錶達質粒,定嚮剋隆入穿梭載體pAdTrack-CMV,PmeⅠ酶切線性化穿梭質粒轉化改造的E.coliBJ5183(含腺病毒載體pAdEasy-1)感受態細菌產生重組腺病毒載體,用PacⅠ線性化重組質粒,迴收轉染293A細胞包裝病毒顆粒,經過3輪擴增,感染肝原代細胞,觀察感染效率及檢測基因錶達情況.通過對小鼠不同時間段的饑餓處理,提取肝髒RNA做RT-PCR,實時定量PCR檢測CTGF基因在不同營養條件下的變化情況.結果 成功包裝CTGF的腺病毒,感染效率達90％以上.CTGF在不同營養條件下錶達情況不同,併且與糖脂代謝重要基因過氧化物酶體增值激活受體γ共激活因子1α錶達情況一緻.饑餓24h,CTGF上調(3.38±0.51)倍；饑餓48h,CTGF上調(5.26±1.25)倍(P＜0.05).結論 初步認定CTGF可能參與糖脂代謝.
목적 구건급감정단백련접조직생장인자(CTGF)기인과표체선병독,초보탐구CTGF재당지대사방면적공능.방법 극륭CTGF과표체질립,정향극륭입천사재체pAdTrack-CMV,PmeⅠ매절선성화천사질립전화개조적E.coliBJ5183(함선병독재체pAdEasy-1)감수태세균산생중조선병독재체,용PacⅠ선성화중조질립,회수전염293A세포포장병독과립,경과3륜확증,감염간원대세포,관찰감염효솔급검측기인표체정황.통과대소서불동시간단적기아처리,제취간장RNA주RT-PCR,실시정량PCR검측CTGF기인재불동영양조건하적변화정황.결과 성공포장CTGF적선병독,감염효솔체90％이상.CTGF재불동영양조건하표체정황불동,병차여당지대사중요기인과양화물매체증치격활수체γ공격활인자1α표체정황일치.기아24h,CTGF상조(3.38±0.51)배；기아48h,CTGF상조(5.26±1.25)배(P＜0.05).결론 초보인정CTGF가능삼여당지대사.
