临床军医杂志
臨床軍醫雜誌
림상군의잡지
CLINICAL JOURNAL OF MEDICAL OFFICER
2011年
6期
1182-1184
,共3页
蒋廷旺%吴传勇%熊怀民%龚燕萍%崔映红%仲人前
蔣廷旺%吳傳勇%熊懷民%龔燕萍%崔映紅%仲人前
장정왕%오전용%웅부민%공연평%최영홍%중인전
发酵%分批补料%肝硬化%M2蛋白
髮酵%分批補料%肝硬化%M2蛋白
발효%분비보료%간경화%M2단백
目的 利用补料分批培养技术大量发酵含有重组质粒pET-28/BPO的DH5-α大肠埃希菌,获得高效表达的M2蛋白,为诊断试剂盒的研发及原发性胆汁性肝硬化(PBC)发病机制研究作准备.方法 发酵过程中,溶氧控制在30％以上,温度37℃,基础培养基培养2.5h后补加甘油作为碳源的补料,4h后加入IPm至终浓度1mmol/L继续培养,诱导表达6h,收集菌体,溶解后按每克细菌加8 m50 mmol/L蛋白酶抑制剂PMSF,破菌后用安玛西亚金属鳌和层析系统纯化目的 蛋白.结果 发酵液最终菌体密度约15 g/L,0D60约8.0.表达的蛋白在上清中约占40％ ～ 50％,包涵体约占50％ ～60％,纯化得到的蛋白浓度约0.6 g/L.结论 分批补料并以甘油作为碳源,以IPTG为诱导剂,可在大肠埃希菌中获得高效表达的M2蛋白.为后期深入研究PBC发病机制奠定了基础.
目的 利用補料分批培養技術大量髮酵含有重組質粒pET-28/BPO的DH5-α大腸埃希菌,穫得高效錶達的M2蛋白,為診斷試劑盒的研髮及原髮性膽汁性肝硬化(PBC)髮病機製研究作準備.方法 髮酵過程中,溶氧控製在30％以上,溫度37℃,基礎培養基培養2.5h後補加甘油作為碳源的補料,4h後加入IPm至終濃度1mmol/L繼續培養,誘導錶達6h,收集菌體,溶解後按每剋細菌加8 m50 mmol/L蛋白酶抑製劑PMSF,破菌後用安瑪西亞金屬鼇和層析繫統純化目的 蛋白.結果 髮酵液最終菌體密度約15 g/L,0D60約8.0.錶達的蛋白在上清中約佔40％ ～ 50％,包涵體約佔50％ ～60％,純化得到的蛋白濃度約0.6 g/L.結論 分批補料併以甘油作為碳源,以IPTG為誘導劑,可在大腸埃希菌中穫得高效錶達的M2蛋白.為後期深入研究PBC髮病機製奠定瞭基礎.
목적 이용보료분비배양기술대량발효함유중조질립pET-28/BPO적DH5-α대장애희균,획득고효표체적M2단백,위진단시제합적연발급원발성담즙성간경화(PBC)발병궤제연구작준비.방법 발효과정중,용양공제재30％이상,온도37℃,기출배양기배양2.5h후보가감유작위탄원적보료,4h후가입IPm지종농도1mmol/L계속배양,유도표체6h,수집균체,용해후안매극세균가8 m50 mmol/L단백매억제제PMSF,파균후용안마서아금속오화층석계통순화목적 단백.결과 발효액최종균체밀도약15 g/L,0D60약8.0.표체적단백재상청중약점40％ ～ 50％,포함체약점50％ ～60％,순화득도적단백농도약0.6 g/L.결론 분비보료병이감유작위탄원,이IPTG위유도제,가재대장애희균중획득고효표체적M2단백.위후기심입연구PBC발병궤제전정료기출.
