中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2012年
3期
6-9
,共4页
王玳玮%赖慧颖%李玉林%杨柳%靳薇%连正兴%邓学梅
王玳瑋%賴慧穎%李玉林%楊柳%靳薇%連正興%鄧學梅
왕대위%뢰혜영%리옥림%양류%근미%련정흥%산학매
IRF1%基因转染%过量表达%COS-7细胞%绵羊
IRF1%基因轉染%過量錶達%COS-7細胞%綿羊
IRF1%기인전염%과량표체%COS-7세포%면양
本研究旨在构建真核表达载体pIRES2-EGFP-IRF1,并在COS-7细胞中过量表达.根据绵羊IRF1基因cDNA序列设计、合成引物,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-IRF1质粒,用电穿孔法,以表达质粒转染COS-7细胞,并用LPS刺激,用定量PCR方法检测IRF1基因的表达量是否升高.结果表明:重组质粒pIRES2-EGFP-IRF1转染细胞后,可以观察到绿色荧光蛋白的表达,并且可以过量表达,与空白对照组相比差异极显著(P＜0.01),说明通过转染的确会对细胞造成影响,排除转染试剂及未融合GFP的作用后,效果仍然明显.利用LPS刺激后,随着作用时间延长至24 h,IRF1基因的表达量较未用LPS作用的对照组有更高倍数的提高.
本研究旨在構建真覈錶達載體pIRES2-EGFP-IRF1,併在COS-7細胞中過量錶達.根據綿羊IRF1基因cDNA序列設計、閤成引物,構建真覈錶達載體pIRES2-EGFP-IRF1質粒,用電穿孔法,以錶達質粒轉染COS-7細胞,併用LPS刺激,用定量PCR方法檢測IRF1基因的錶達量是否升高.結果錶明:重組質粒pIRES2-EGFP-IRF1轉染細胞後,可以觀察到綠色熒光蛋白的錶達,併且可以過量錶達,與空白對照組相比差異極顯著(P＜0.01),說明通過轉染的確會對細胞造成影響,排除轉染試劑及未融閤GFP的作用後,效果仍然明顯.利用LPS刺激後,隨著作用時間延長至24 h,IRF1基因的錶達量較未用LPS作用的對照組有更高倍數的提高.
본연구지재구건진핵표체재체pIRES2-EGFP-IRF1,병재COS-7세포중과량표체.근거면양IRF1기인cDNA서렬설계、합성인물,구건진핵표체재체pIRES2-EGFP-IRF1질립,용전천공법,이표체질립전염COS-7세포,병용LPS자격,용정량PCR방법검측IRF1기인적표체량시부승고.결과표명:중조질립pIRES2-EGFP-IRF1전염세포후,가이관찰도록색형광단백적표체,병차가이과량표체,여공백대조조상비차이겁현저(P＜0.01),설명통과전염적학회대세포조성영향,배제전염시제급미융합GFP적작용후,효과잉연명현.이용LPS자격후,수착작용시간연장지24 h,IRF1기인적표체량교미용LPS작용적대조조유경고배수적제고.
