CAJ | 학술논문

目的研究滚环扩增(RCA)技术结合特异性表面等离子共振(SPR)金膜芯片检测丙型肝炎病毒(HCv)的方法.方法根据丙型肝炎x-tail区域的特异检测序列,设计并合成针对RCA法检测HCV的探针和引物,分成3组(实验组、阴性样品组和阳性样品组)进行RCA实验,验证RCA法检测HCV的特异性.将模板浓度按10倍梯度稀释,评价SPR技术结合RCA法检测的检测限.在普通金膜芯片的基础上进行表面化学处理,形成高特异性核酸芯片,用抗蛋白实验验证芯片抗蛋白能力.采用双通道SPR仪对RCA反应及信号放大反应进行实时观测.运用SPR技术结合RCA法检测63例临床血液样品,并与Real-Time PCR法比较,评价其灵敏度和特异度.结果 SPR技术结合RCA法对HCV阳性标准品的最低检测浓度为1 pmol/L,低于Real-Time PCR法的检测限(0.1 nmol/L).SPR芯片具备良好的抗蛋白质非特异性吸附能力.双通道SPR仪对RCA芯片系统的检测信噪比为100,实现了对HCV的检测.对临床样品的检测灵敏度为90.0％( 27/30),特异度为84.8％( 28/33)(x2=8.10,P=0.004).结论 SPR技术结合RCA法将生物传感技术及原位扩增技术相结合,实现了快速、非标记和实时检测HCV.
목적 연구곤배확증(RCA)기술결합특이성표면등리자공진(SPR)금막심편검측병형간염병독(HCv)적방법.방법 근거병형간염x-tail구역적특이검측서렬,설계병합성침대RCA법검측HCV적탐침화인물,분성3조(실험조、음성양품조화양성양품조)진행RCA실험,험증RCA법검측HCV적특이성.장모판농도안10배제도희석,평개SPR기술결합RCA법검측적검측한.재보통금막심편적기출상진행표면화학처리,형성고특이성핵산심편,용항단백실험험증심편항단백능력.채용쌍통도SPR의대RCA반응급신호방대반응진행실시관측.운용SPR기술결합RCA법검측63례림상혈액양품,병여Real-Time PCR법비교,평개기령민도화특이도.결과 SPR기술결합RCA법대HCV양성표준품적최저검측농도위1 pmol/L,저우Real-Time PCR법적검측한(0.1 nmol/L).SPR심편구비량호적항단백질비특이성흡부능력.쌍통도SPR의대RCA심편계통적검측신조비위100,실현료대HCV적검측.대림상양품적검측령민도위90.0％( 27/30),특이도위84.8％( 28/33)(x2=8.10,P=0.004).결론 SPR기술결합RCA법장생물전감기술급원위확증기술상결합,실현료쾌속、비표기화실시검측HCV.